毛细管电泳技术(Capillary electrophoresis,CE)因其具有分析速度快、分离效率高、样品与试剂消耗量少并且可以与多种检测手段联用等优势,已逐渐发展成为酶分析的重要工具,并被广泛应用于酶分析的众多领域。本论文围绕CE在酶分析中的应用,开展了基于CE技术的L-型乳酸脱氢酶固定化酶微反应器的研究和重组人糖基转移酶的活性研究。1.发展了一种以氧化石墨烯(Graphene oxide,GO)为载体的毛细管电泳固定化酶微反应器(CE-immobilized enzyme microreactors,CE-IMERs)。首次利用GO与带负电的生物酶之间的疏水相互作用和/或π-π相互作用,通过层层自组装制备了L-型乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,L-LDH)-CE-IMERs。利用扫描电镜(SEM)、傅里叶变换红外光谱法(FT-IR)和紫外可见光谱法(UV-vis)对所制备的CE-IMERs进行表征,证明L-LDH成功固定在毛细管内表面带负电荷的GO层上。研究结果表明所提出的CE-IMERs是基于GO的分子骨架与L-LDH酶分子中芳香基残基之间的疏水相互作用和/或π-π相互作用。我们对固定化L-LDH对于底物丙酮酸和NADH的K_m值分别进行了测定,测定结果与自由酶的K_m值相近。制备的CE-IMERs具有良好的日间重现性和批次间重现性,其酶活性在5天使用后仍可保持在初始酶活性的90%左右,并成功地应用于啤酒样品中丙酮酸含量的测定。2.发展了一种基于毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-laser induce fluorescence,CE-LIF)快速检测重组人糖基转移酶(Recombinant human O-GlcNAc transferase,OGT)活性的方法。OGT是一种至关重要的细胞内源酶,能够通过催化氧连接的氮乙酰葡糖胺(O-GlcNAc)单体转移到蛋白质的丝氨酸或苏氨酸残基上,进而调节大量的细胞进程,其活性的失调也会与一系列疾病密切相关,如阿尔兹海默症、糖尿病和癌症等。我们设计了一种AF488修饰的肽链,此肽链有能够被OGT糖基化的丝氨酸活性位点。O-GlcNAc糖基化修饰过程以非放射性尿苷-乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)为糖基供体,以AF488修饰的肽链为底物,当OGT存在时即可产生糖基化肽,与未反应的原始多肽共同存在于反应体系中,经CE-LIF分离和检测,可以得到荧光信号强度与OGT浓度之间的对应关系。该方法的灵敏度高,检出限为1.71 nM。可以应用于OGT酶活性测定,酶反应动力学研究,酶抑制剂的筛选以及细胞内酶活性的测定,为日后疾病的诊断提供潜在的治疗靶点。