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目的: 本研究旨在探讨七叶胆苷Ⅸ(Gypeno sideⅨ,Ⅸ)、越南人参皂苷R7(Vinaginsenoside R7,R7)对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)及肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα,TNFα)联合诱导下星形胶质细胞激活的抑制作用及机制。 方法: 建立LPS及TNFα联合诱导星形胶质细胞激活模型并进行药物筛选;Greiss法检测NO; CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测培养基中炎症因子的浓度;实时定量PCR(RT-PCR)法检测细胞中相关炎症基因的表达;双荧光素酶报告基因法检测细胞中NFκ信号分子的激活;细胞免疫化学(immunocytochemistry,ICC)判断NF-κB入核情况;免疫印迹法(Western blot,WB)法检测细胞中炎症及NF-κB通路相关蛋白表达;免疫组化染色法(IHC)观察小鼠脑中胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)阳性细胞数量;RT-PCR法和WB法检测小鼠皮层中相关炎症因子基因和蛋白表达。 结果: 1.建立体外大鼠星形胶质瘤细胞C6炎症模型,对皂苷单体进行筛选,优选出Ⅸ和R7进行后续实验; 2.Ⅸ浓度依赖性抑制C6细胞在炎症因子刺激之下NO释放水平,其半数抑率IC50约为23.82μM;高浓度对C6细胞并无毒性作用(P>0.05);显著降低C6细胞中iNOS、TNFα、IL-6、IL-1β和COX-2的基因表达,对TLR4有下调趋势;显著抑制C6细胞中IL-6、TNFα的蛋白分泌;显著抑制NF-κB转录活性(P<0.001);抑制iNOS的蛋白表达上调,同时显著抑制IκB-α(P<0.05)、细胞核内NF-κB(P<0.01)、p38 MAPK(P<0.001)的磷酸化水平;改善原代星形胶质细胞激活形态,减少原代细胞中NF-κB的入核;LPS/TNFα(LPS1μg·mL-1、TNFα10 ng·mL-1)联合刺激C6细胞可以显著上调ATP的释放(P<0.001);1000、10000μM ATP对C6细胞进行刺激,显著促进NO释放(P<0.001);Ⅸ可以显著下调LPS/TNFα的激活C6细胞中ATP的释放(P<0.001); 3.Ⅸ下调LPS诱导神经炎症小鼠海马区GFAP阳性细胞数量(P<0.01);Ⅸ(3、10、30 mg/kg)可以显著降低或下调小鼠脑中IL-1β、iNOS、TNFα、IL-1β、COX-2、TLR4、GFAP及CD11b的基因表达;显著抑制小鼠皮层中NF-κB、IκB的磷酸化水平(P<0.01),下调iNOS(P<0.01)、GFAP(P<0.05)的蛋白表达; 4.R7量效相关性降低炎症状态下C6细胞的NO释放水平,其IC50约为34μM;减少LPS/TNFα刺激造成的细胞增殖;显著降低iNOS、TNFα、IL-1β以及COX-2的基因表达;减少TNFα(P<0.001)及IL-6(P<0.001)的释放;不同浓度均可显著抑制NF-κB转录活性;同时可以抑制iNOS蛋白的上调(P<0.001),下调COX-2。 结论: 1.七叶胆苷Ⅸ可以抑制由LPS/TNFα诱导的星形胶质细胞激活,降低由LPS诱导的小鼠神经炎症模型中星形胶质细胞的过度激活,减少炎性介质的产生,其机制可能通过抑制NF-κB入核,下调p38 MAPK的激活,进而减少神经炎症的损害相关; 2.越南人参皂苷R7可以抑制由LPS/TNFα诱导的星形胶质细胞激活,其机制可能与抑制NF-κB/MAPK信号通路有关。