【摘 要】
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Flowering Locus T（FT）是开花途径中的一个关键整合因子,能够正向调控植物开花。在模式植物中,成花素FT蛋白通过嫁接可以在砧穗之间移动,但是这种现象在木本植物中鲜有报道。FT-INTERACTING PROTEIN 1（FTIP1）作为FT蛋白移动过程中的分子伴侣,可能参与FT蛋白的装载、移动与卸载过程。本研究从甜橙中克隆出柑橘FTIP1（CiFTIP1）,构建了 35S:CiFT
【基金项目】
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国家重大研发计划（2018YFD1000104）； 国家自然科学基金（31772252和31872045）；
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Flowering Locus T（FT）是开花途径中的一个关键整合因子,能够正向调控植物开花。在模式植物中,成花素FT蛋白通过嫁接可以在砧穗之间移动,但是这种现象在木本植物中鲜有报道。FT-INTERACTING PROTEIN 1（FTIP1）作为FT蛋白移动过程中的分子伴侣,可能参与FT蛋白的装载、移动与卸载过程。本研究从甜橙中克隆出柑橘FTIP1（CiFTIP1）,构建了 35S:CiFTIP1超表达载体、35S:CiFTIP1-CiFT、双元表达载体,以及CiFTIP1启动子融合GUS蛋白的表达载体。分别进行了拟南芥、番茄和柑橘的遗传转化,探究了CiFTIP1的基因功能。主要工作及结论如下:1.在甜橙中克隆的CiFTIP1基因仅包含一个外显子,无内含子结构,其cDNA有2370个碱基,编码789个氨基酸;CiFTIP1蛋白含有3个C2结构域和1个PRTC结构域。通过qRT-PCR检测了CiFTIP1在甜橙的根、茎、叶、花、果等不同组织中的表达情况,发现这个基因主要在叶中表达,茎中的表达量次之,在根、花、果中也都有少量的表达。2.通过酵母双杂交、双分子荧光互补和Pull-down三个实验,证明了CiFTIP1与CiFT存在互作关系。在本氏烟叶片中瞬时表达CiFTIP1融合GFP报告基因,结果显示CiFTIP1基因定位于内质网膜,与双分子荧光互补实验显示的CiFTIP1与CiFT互作部位相同。3.构建了 35S:CiFTIP1超表达载体,并进行了拟南芥的遗传转化。经过观察统计,CiFTIP1转基因阳性苗莲座叶片数增多,出现晚花表型。4.对柑橘CiFTIP1启动子进行了顺式元件分析。发现其包含Box4、G-Box、LAMP-element、TCT-motif等响应光周期的有关元件;MBS等参与干旱诱导的MYB类转录因子结合位点;以及多种植物激素响应元件,如脱落酸、水杨酸、生长素以及茉莉酸甲酯等。分别构建酵母单杂交诱饵载体pAbAi-pFTIP1和酵母双杂交载体pGBKT7-FTIP1,进行了酵母单双杂交筛库实验。
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