紫色悬钩子（Rubus irritans Focke）是蔷薇科（Rosaceae）悬钩子属植物,资源丰富,其果实、茎叶及种子中含有大量活性物质,如黄酮类、人参皂苷、多糖、多酚等,具有极高的药用及经济价值。胰岛素抵抗（Insulin resistance,IR）是2型糖尿病发生的主要特征,因此,改善IR是治疗2型糖尿病的途径之一。脂肪组织可以参与IR和代谢综合征的调节,并且机体在产生IR时,会导致相关炎症因子的产生,例如肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factorα,TNFα）等,从而阻滞胰岛素信号的传导。为此,本实验利用TNFα与3T3-L1脂肪细胞共孵育,通过对比胰岛素短暂刺激前后细胞中蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）的磷酸化表达水平,建立3T3-L1脂肪细胞IR模型,同时分离制备紫色悬钩子化合物,筛选紫色悬钩子降糖活性成分,探讨紫色悬钩子对脂肪细胞分化及糖代谢的影响及机制。1.利用MCI中压色谱柱分离制备紫色悬钩子组分,采用经典的“鸡尾酒法”诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成为成熟的脂肪细胞,MTT法检测细胞增殖,油红O染色及试剂盒检测分析细胞的脂质积累水平。TNFα诱导培养建立3T3-L1脂肪细胞IR模型,利用Western Blot以及流式细胞术验证模型并筛选降糖活性组分。结果表明,当紫色悬钩子组分的质量浓度不大于100μg/m L时,对细胞活力的影响无显著性（P＞0.05）,Fr.2、Fr.3、Fr.4、Fr.5可降低细胞中脂质的积累（P＜0.05）。当TNFα浓度大于等于15 ng/m L,诱导时间大于等于72 h能够显著降低胰岛素刺激后p-Akt的表达（P＜0.01）,使3T3-L1脂肪细胞产生IR,验证了TNFα诱导培养能够成功建立细胞IR模型。同时筛选了紫色悬钩子组分,最终结果表明,Fr.3改善3T3-L1脂肪细胞IR作用效果最显著（P＜0.05）。2.利用中压和高压液相色谱对紫色悬钩子的化学成分进行研究。利用中压色谱柱对Fr.3进行预处理,凝胶色谱柱分离得到不同的馏分,建立了中压/高压反相模式和高压/高压反相色谱法,最终制备出8个纯度大于95%的化合物。根据~1H-NMR和13C-NMR结合参考文献,最终得到8个紫色悬钩子单体化合物,分别为quercetin-3-O-β-D-glucuronide（X-1）、quercetin 3-O-（2’’-O-galloyl）-β-D-galacturonopyranoside、β-D-glucopyranose 1-[（E）-3-（3,4-dihydroxyphenyl）-2-propenoate]（X-2）、Syriacatin（X-3）、kaempferol-3-O-β-D-glucuronide（X-4）、quercetin 3-O-（2’’-O-galloyl）-β-D-glucuronopyranoside（X-5）、kaempferol-3-O-β-D-galacturonopyranoside（X-6）、quercetin-3-O-β-D-glucuronopyranoside methyl ester。3.对分离出的紫色悬钩子单体化合物进行降脂降糖机制的研究。本实验通过RT-PCR和Western Blot实验研究了紫色悬钩子单体化合物对3T3-L1细胞中氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ）、CCAAT增强子结合蛋白（CCAAT enhancer-binding proteinα,C/EBPα）、固醇调节原件结合蛋白1c（Sterol regulatory element-binding protein,SREBP-1c）和脂肪酸结合蛋白4（Fatty acid-binding protein 4,FABP4）脂质相关因子的影响。结果表明,X-1、X-3、X-5能够增加细胞中脂质的积累,提高PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c和FABP4 m RNA及蛋白的表达;X-2、X-4、X-6能够减少细胞中脂质的积累,降低PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c和FABP4 m RNA及蛋白的表达。同时,建立3T3-L1脂肪细胞IR模型,探讨紫色悬钩子单体化合物改善IR作用的机制。结果表明,分离得到的紫色悬钩子单体化合物均可以改善TNFα诱导产生的IR作用,其可能是通过上调PI3K/Akt通路中相关蛋白的表达,从而增加细胞对胰岛素的敏感性。综上,本实验验证了紫色悬钩子具有显著降糖作用的活性成分,并制备出单体化合物,初步探讨了单体化合物的降糖机制,其可以通过上调胰岛素信号通路PI3K/Akt中的相关蛋白,改善IR作用,为进一步对紫色悬钩子植物治疗糖尿病的开发利用提供了更多的科学依据。