目的:构建大肠杆菌Ag43表达系统,包括缺失Ag43基因的大肠杆菌和Ag43表达载体。通过绿色荧光信号蛋白GFP,检测构建的该表达系统是否具有将外源基因表达于大肠杆菌表面的能力。最后利用这一表达系统构建细菌表面嵌合蛋白Ag43/IgE Fcε3的表达载体,并在诱导该载体表达蛋白后收集该蛋白。以期该蛋白能特异性的下调小鼠IgE水平,从而对小鼠的变应性鼻炎产生防治作用。方法:1、利用Red重组系统敲除大肠杆菌JM109的Ag43基因。将大部分Ag43的基因序列（包括完整的信号肽和β结构域,以及部分α结构域）插入到质粒pET-22b中,从而获得Ag43的表达载体。2、利用基因工程重组技术将绿色荧光信号蛋白GFP的基因插入到Ag43的表达载体中,将获得的Ag43/GFP表达载体转化之前敲除了Ag43基因的突变菌,并用IPTG诱导表达,在荧光显微镜下观察是否能看到绿色荧光。若出现绿色荧光,则继续观察在不同温度、不同时长下加热表达GFP的细菌后绿色荧光的表达情况,以了解提取嵌合蛋白的最佳条件。3、利用相同的基因重组技术将小鼠IgE Fcε3的基因序列插入到表达载体Ag43中,构建一种对小鼠变应性鼻炎有防治作用的嵌合蛋白Ag43/IgE Fcε3的表达载体。将该载体转化突变株,用IPTG诱导表达后,在之前了解到的最佳提取嵌合蛋白的条件下提取嵌合蛋白。并利用western blot实验来检测这一蛋白是否具有针对小鼠IgE蛋白的抗原性。结果:1、利用Red重组系统敲除大肠杆菌JM109的Ag43序列,测序结果表明本实验成功敲除了大肠杆菌JM109的Ag43基因。构建表达载体Ag43,测序结果报告该载体含有Ag43的大部分基因序列。2、构建的绿色荧光信号蛋白载体Ag43/GFP,在转化缺失Ag43基因的大肠杆菌突变株并诱导其表达后,在荧光显微镜下能观察到绿色荧光。在不同温度、不同时长下加热表达GFP的细菌,了解到提取嵌合蛋白最佳的条件是在50℃～60℃的温度下,水浴加热60分钟。3、构建嵌合蛋白表达载体Ag43/IgE Fcε3,测序结果显示该载体的构建正确。将这一载体转化突变株,并用IPTG诱导其表达后,最佳条件下收集嵌合蛋白Ag43/IgE Fcε3做western blot实验,实验结果表明该蛋白具有针对小鼠IgE蛋白的抗原性。结论:本研究成功构建了大肠杆菌Ag43表达系统,验证了该系统具有表达外源基因到细菌表面的能力。并利用这一系统构建了嵌合蛋白Ag43/IgE Fcε3,初步证实了该蛋白具有针对小鼠IgE蛋白的抗原性。因此该蛋白疫苗可能具有特异性下调小鼠IgE水平的能力,从而可能对小鼠的变应性鼻炎产生防治作用。