银耳是食用菌家族中重要成员之一,因其物美价廉成为探究食用菌多糖的主窗口。通过响应面优化、正交实验确定提取最佳工艺的复合酶配比为纤维素酶:木瓜蛋白酶:果胶酶15:25:11;液料比80:1,超声功率480W,超声时间40min,复合酶含量2.0%;通过对水溶法、复合酶法、超声法、超声复合酶法四种方法提取的银耳多糖的总糖、糖醛酸、硫酸根含量等理化指标和抗氧化活性对比,得出不同方法提取得到的多糖具有不同的理化指标但均表现出良好的抗氧化活性;通过红外分析在特征峰基团上可以初步判断提取方法的改变并未改变多糖的结构。利用水溶醇沉得到TFP30、TFP60、TFP80三个组分,三组分的总糖含量为40.32%、45.31%、72.13%;比较TFP-水、TFP30与TFP60组分的抗氧化能力,结果显示三组分均具有较好的抗氧化活性;通过对比各个组分的理化指标及抗氧化活性,选择TFP60组分做进一步的分离纯化。对TFP60组分的分离纯化、UV、IR、HPLC分析得到TFP60-S纯组分,其为酸性多糖,分子量为5.6×10~5Da。从单糖组成分析、IR和GC-MS分析得出TFP60-S的分子构型为α-型,由甘露糖为主链,木糖和岩藻糖(含少量葡萄糖)构成其支链结构并含有O-乙酰基基团的酸性杂多糖。根据GC-MS峰面积计算甘露糖、木糖、岩藻糖和葡萄糖的摩尔比约为3.03:1:0.78:0.46。通过研究TFP30,TFP60,TFP80,TFP60-S四组分的抗肿瘤活性,用MTT法对A549和CHL细胞进行了体外增殖实验,结果表明TFP60-S具有较好的抑制肿瘤细胞的活性且对正常细胞无毒副作用。