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第一部分：IPEX新发突变一例分子与临床特征研究目的：探讨1例X连锁多内分泌腺病、肠病伴免疫失调综合征患儿FOXP3基因变异、蛋白表达水平、免疫表型及临床特征。方法：对我院收治的1例表现为早发性顽固性腹泻、自身免疫现象、内分泌功能异常、生长发育落后、IgE增高的疑似IPEX男性患儿外周血单个核细胞采用流式细胞仪检测CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例和FOXP3蛋白表达，PCR法进行外周血FOXP3基因扩增及测序、比对分析，并与100例正常儿童FOXP3基因序列比较除外多态性以确定致病突变。结果：该患儿CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞比例较正常对照明显减低，FOXP3蛋白表达量与正常对照无显著差异。经基因分析确诊为IPEX，其FOXP3基因第8号外显子末位碱基错义突变(G>A)，导致FOXP3蛋白323位氨基酸由谷氨酸替换为赖氨酸(Glu323Lys)，突变基因的转录产物中除了一部分为错义突变外，还形成了多种异常拼接体，部分为缺失第8号外显子，部分同时缺失7、8号外显子，另有部分完全或部分缺失5号外显子及部分11号外显子。患儿母亲为该突变的携带者。100例正常儿童FOXP3基因相同位点未见变异。结论：通过临床、免疫学筛查、基因分析及流式细胞术，确诊一例发生FOXP3多种不同异常拼接及错义突变的IPEX患儿，为此前未报到的新发突变，对早发顽固性腹泻、湿疹、内分泌功能异常伴自身免疫现象及不明肾脏损害婴幼儿，应考虑IPEX可能并进行Treg流式细胞术快速筛查及FOXP3基因分析以最终确诊。第二部分：XLP-1型患者临床、基因和蛋白表达分析目的：探讨SH2D1A基因突变所致XLP-1型患儿的临床及分子特征，为临床甄别和诊断此病提供信息。方法：对15例临床疑诊为XLP-1型的男性患儿，收集归纳临床资料和相关实验室检查结果，采取患儿及其亲属新鲜外周血进行流式细胞术检测PBMC内SAP蛋白的表达，提取外周血DNA和RNA，PCR法扩增SH2D1A基因cDNA序列直接进行测序。在NCBI基因库比对目的序列，发现突变位点后扩增相应外显子及或进行TA克隆进一步分析确定突变类型，同时对相关亲属进行基因分析。结果：通过对15例疑诊XLP-1型患儿的基因和蛋白检测，发现3例来自无血缘关系的不同家族的患儿存在SH2D1A基因突变，除外12例。3例突变均除外了基因多态性可能，其中2例为新发突变。患儿1的母亲、外祖母及患儿2的母亲为致病突变的携带者。行流式细胞术检测的患儿1和2，SAP蛋白表达均明显降低。患者1的母亲SAP蛋白表达为双峰，患者2的母亲蛋白表达正常。结论：本研究通过对患儿进行临床表现和免疫学初筛，同时借助基因序列分析和流式蛋白检测，确诊了3例SH2D1A基因不同突变的患者。对于符合XLP-1型临床表现的患儿应尽快进行SAP蛋白检测和SH2D1A基因分析。