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胆管癌是胆道常见的恶性肿瘤,虽然在胆管癌诊治方面取得一些进展,但其预后仍较差,其中重要的原因是早期诊断困难,而当疾病处在进展期时,肿瘤细胞往往已通过血道、淋巴转移,从而导致外科根治性切除率低。随着血管生成在肿瘤发生、发展及预后中作用和地位的确立,抗肿瘤血管生成策略成为目前肿瘤治疗研究的热点。既往认为胆管癌是一种血管分布(相对肝癌)较少的肿瘤,但随着对胆管癌形成分子机制研究的深入,血管生成在胆管癌发生发展中的重要性已逐步被重视。Survivin是一种结构独特的凋亡蛋白抑制因子家族的成员,特异地表达于人和鼠的胚胎发育组织以及多数人类肿瘤细胞。研究表明,Survivin在细胞凋亡和细胞周期的基因调控中发挥重要作用,而且在肿瘤血管新生调节中是至关重要的,使其成为一个非常有吸引力的癌症治疗靶点;环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是前列腺素生物合成的限速酶,大量研究表明COX-2表达增强与多种肿瘤的发生发展有关,COX-2上调可能是肿瘤发生过程中一个重要的限速步骤,COX-2可能通过促进肿瘤细胞增殖和抑制细胞凋亡、促进肿瘤恶性转化、促进肿瘤血管生成等机制参与肿瘤的发生发展;关于Survivin和COX-2在肿瘤血管生成角色方面的报道并不多见。我们前期的研究发现Survivin和COX-2基因参与了胆管癌细胞增殖和凋亡过程,本实验欲了解Survivin、COX-2与胆管癌血管生成的关系及胆管癌血管生成的可能机制,为胆管癌的抗肿瘤血管生成治疗提供新依据。目的:研究Survivin、COX-2与胆管癌血管生成的关系及胆管癌血管生成的可能机制。方法:采用SP免疫组化染色检测Survivin、COX-2、VEGF和MVD在胆管癌临床病理标本中的表达。胆管癌细胞株QBC939于体外培养,每日倒置显微镜下观察细胞生长情况。应用不同浓度的选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利分别处理细胞,于作用的不同时间收集细胞,应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmunoadsordent assay ,ELISA)检测药物处理前后培养细胞上清液中分泌的VEGF浓度;应用RT-PCR检测药物处理前后胆管癌细胞株QBC939中COX-2/VEGF/ Survivin基因的表达变化;采用SP免疫组化染色观察药物处理前后胆管癌细胞株QBC939中COX-2/VEGF/Survivin蛋白的表达情况。结果: (1)免疫细胞化学结果显示胆管癌组织MVD值、COX-2、VEGF和Survivin阳性表达率显著高于正常胆管组织(P<0.05);(2)胆管癌组织COX-2基因的表达与VEGF表达、MVD值成正相关;(3)胆管癌组织Survivin基因表达与VEGF表达、MVD值成正相关;(4) ELISA表明随着尼美舒利浓度增加,胆管癌细胞QBC939上清液中分泌的VEGF浓度下降;(5)免疫组化测定显示随着尼美舒利浓度增加,COX-2、VEGF和Survivin在QBC939细胞浆中表达下调;(6) RT-PCR测定显示随着尼美舒利浓度增加,COX-2、VEGF和Survivin在QBC939细胞核中表达下调。结论: (1) Survivin和COX-2在胆管癌中高度表达可能与胆管癌血管发生有密切联系;(2)选择性COX-2抑制剂尼美舒利对体外培养的胆管癌细胞株QBC939的血管生成相关因子有抑制作用,并且可能通过COX-2途径发挥其抗肿瘤血管生成作用。