动物胃肠道中存在着数量繁多的微生物菌群,菌群中的微生物能够参与机体的多种生理生化活动,对宿主的生长发育、免疫功能产生影响。其中关于胃肠道益生菌研究越来越多,其重要原因在于益生菌能调节胃肠道平衡,影响动物机体健康。本试验旨在通过对延边黄牛犊牛瘤胃微生物多样性分析,分离出益生菌,并对腹泻小鼠进行防治功能验证,为今后动物体内益生菌的开发及应用提供理论研究基础。本试验采集3头延边黄牛犊牛瘤胃液,进行高通量测序分析得到微生物类型,根据测序结果进行益生菌的BHI培养基高温培养、酸性BHI培养基培养、牛胆盐溶液培养、分离鉴定、体外抑菌试验、抗生素敏感性试验、16S r RNA测序;本试验选用BALB/C小鼠成功建立大肠杆菌腹泻小鼠模型后,将小鼠分为地衣芽孢杆菌治疗组、地衣芽孢杆菌预防组、地衣芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌混合治疗组、地衣芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌混合预防组、阳性模型组、空白对照组进行益生菌对腹泻小鼠的治疗与预防效果研究。5天后采小鼠血清进行IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γELISA检测。最后,取小鼠小肠用福尔马林固定,做病理切片观察小肠变化。高通量测序分析结果得出延边黄牛犊牛瘤胃内菌群微生物具有多样性,具体分布情况如下:17个纲,19个目,31个科,80个属,89个种。本试验进行了犊牛瘤胃液中益生芽孢杆菌筛选试验,通过镜下观察、生化鉴定、16S r RN A测序结果表明两株菌株分别为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,分别命名为bl、bs。抗性筛选后得到的bl,bs均对酸碱胆盐及高热有耐性;体外抑菌试验结果显示bl、bs对E.coli均有抑制作用;抗生素敏感试验结果表明bl、bs对氯霉素、头孢曲松、四环素、环丙沙星、恩诺沙星、万古霉素均敏感,对林可霉素、青霉素、氨苄西林、阿莫西林均有耐药性,bl对红霉素、克拉霉素敏感,对链霉素有耐药性,bs对链霉素敏感,对红霉素、克拉霉素有耐药性;肠道定植试验表明bl、bs均不能长期定植在肠道内。小肠组织学观察结果表明:空白组小肠切片镜下可见肠绒毛结构完整,肠上皮细胞形态完整,排列紧密;治疗组小肠切片镜下可见小肠绒毛显著增宽,绒毛固有层轻度水肿,肠上皮细胞基底膜与固有层分离,炎性细胞浸润;预防组小肠切片镜下可见部分肠绒毛结构被破坏,同时固有层底端可见乳糜管水肿扩张;混合治疗组小肠切片镜下可见肠绒毛结构相对正常,绒毛固有层轻微水肿肠腔内可见少量食物残渣与蓝紫色细菌团块;混合预防组小肠切片镜下可见肠绒毛结构基本完整,仅见部分肠绒毛上皮细胞脱落进入肠腔,固有层轻度水肿;阳性模型组小肠切片肠绒毛结构被破坏明显,绒毛固有层严重水肿,肠上皮细胞基底膜与固有层分离,顶端上皮细胞坏死,部分肠绒毛整根断裂或溶解;ELISA结果显示阳性模型组小鼠的血清中IL-6、TNF-α、IFN-γ含量对比空白对照组有显著增高（p＜0.05）,治疗组、预防组、混合治疗组、混合预防组对比阳性模型组有显著降低（p＜0.05）;阳性模型组对比空白对照组小鼠血清中IL-4含量有显著降低（p＜0.05）,治疗组、预防组、混合治疗组、混合预防组对比阳性模型组有显著升高（p＜0.05）。综上所述:基于高通量测序得出瘤胃液菌群种类,试验筛选出两株芽孢杆菌经鉴定分别为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌,两株菌均不能在胃肠中定植。复合益生菌能有效保护肠道,使感染大肠杆菌小鼠的血清学指标IL-6、TNF-α、IFN-γ降低,IL-4升高,对小鼠细菌性腹泻有较好的防治作用。