【摘 要】
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【目的】探讨TET2/UQCRH途径在FGF-2抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡中的作用。【方法】1、体外培养人主动脉平滑肌细胞（VSMCs）,同步化处理后,加50 ng/m L FGF-2处理24小时（后续FGF-2处理均相同）,或加50 n M FGFRs泛抑制剂LY2874455预处理15分钟后,再加入FGF-2处理24小时,实验分组为:对照组、FGF-2组、FGF-2+LY287445
【基金项目】
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湖南省教育厅科研项目（20B493）； 衡阳市科技计划项目（2019yj010683）； 生物流变科学与技术教育部重点实验室（重庆大学）（CQKLBST-2018-010）；
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【目的】探讨TET2/UQCRH途径在FGF-2抑制血管平滑肌细胞（VSMCs）凋亡中的作用。【方法】1、体外培养人主动脉平滑肌细胞（VSMCs）,同步化处理后,加50 ng/m L FGF-2处理24小时（后续FGF-2处理均相同）,或加50 n M FGFRs泛抑制剂LY2874455预处理15分钟后,再加入FGF-2处理24小时,实验分组为:对照组、FGF-2组、FGF-2+LY2874455组。采用Hoechst33342和PI染色检测细胞凋亡,CCK-8实验检测细胞增殖情况,western blot检测凋亡相关蛋白procaspase-3、cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2以及TET2、UQCRH的表达水平。2、TET2基因过表达慢病毒转染VSMCs,构建TET2基因过表达VSMCs模型。在TET2基因过表达VSMCs中加入FGF-2处理,实验分组为:对照组、FGF-2组、TET2基因过表达（OETET2）+FGF-2组。采用Hoechst33342和PI染色检测细胞凋亡,CCK-8实验检测细胞增殖情况,western blot检测凋亡相关蛋白以及TET2的表达水平。3、构建UQCRH基因过表达质粒,转染VSMCs,建立UQCRH基因过表达VSMCs。在UQCRH基因过表达VSMCs中加入FGF-2处理,实验分组为:对照组、FGF-2组、UQCRH基因过表达（OEUQCRH）+FGF-2组。使用Hoechst33342和PI染色、CCK-8实验检测细胞凋亡及增殖情况,western blot检测凋亡相关蛋白以及UQCRH的表达水平。4、运用NCBI、methprimer网站预测分析UQCRH基因启动子Cp G岛位点。FGF-2处理TET2基因过表达VSMCs后,采用western blot检测UQCRH的表达水平。【结果】1、FGF-2可抑制VSMCs凋亡、促进其增殖,下调促凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax表达、上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达（与对照组相比,P＜0.05）,但不影响pro-caspase-3表达（与对照组相比,P＞0.05）,LY2874455可对抗FGF-2的上述作用（与FGF-2组相比,P＜0.05）。FGF-2可抑制TET2和UQCRH的表达（与对照组相比,P＜0.05）,LY2874455可拮抗FGF-2对TET2、UQCRH表达的抑制作用（与FGF-2组相比,P＜0.05）。2、成功构建VSMCs TET2基因过表达细胞模型,加FGF-2处理后,形态学结果显示VSMCs凋亡增加,western blot结果显示TET2、cleaved caspase-3、Bax表达增加,Bcl-2表达减少（与FGF-2组相比,P＜0.05）。CCK-8结果显示,VSMCs增殖减少（与FGF-2组相比,P＜0.05）。3、成功构建VSMCs UQCRH基因过表达细胞模型,加入FGF-2处理后,UQCRH可以拮抗FGF-2抗VSMCs凋亡和促其增殖作用（与FGF-2组相比,P＜0.05）。Western blot结果显示,VSMCs促凋亡相关蛋白表达上调、抗凋亡蛋白表达下调（与FGF-2组相比,P＜0.05）。4、生物信息学分析发现UQCRH基因启动子区域存在3个Cp G岛。Western blot结果显示,过表达TET2能上调FGF-2处理的VSMCs中UQCRH的表达（与FGF-2组相比,P＜0.05）。【结论】FGF-2通过抑制TET2表达,下调UQCRH表达,减少VSMCs凋亡、促进其增殖。
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