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据统计乳腺癌已位居全球女性恶性肿瘤之首，并严重影响了女性的健康。其发病率和致死率仍然高居不下，尤其是发病率还在不断增加。而乳腺癌的复发和转移是导致患者死亡的最主要原因。Estrogen receptor(ER)、progesteronereceptor(PR)及human epidermal growth factor receptor-2(HER-2)均呈阴性表达的三阴性乳腺癌，则具有更强侵袭力、较易发生局部复发和远处转移特点。 上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是乳腺癌浸润和转移的关键机制。因此研究乳腺癌EMT发生的分子机制，对于改善预后，提高患者的生存率至关重要。Livin是凋亡抑制蛋白家族之新成员，能够与凋亡蛋白酶结合，抑制其所介导的细胞凋亡，促进细胞迁移和侵袭，并与肿瘤的恶性程度增高及不良预后相关。最新报道，Livin可促进结直肠癌EMT发生。而Livin在乳腺癌EMT和转移中的作用及潜在机制尚不清楚。近些年逐渐有报道，p38和糖原合成激酶3β（glycogen synthesis kinase，GSK3β）与肿瘤的侵袭转移及EMT发生有关。我们前期实验已证实，抑制p38通路活性可下调p-GSK3β表达水平，从而增加GSK3β活性，降低乳腺癌细胞的侵袭能力。那么，Livin能否通过激活p38/GSK3β通路调控EMT过程，从而促进乳腺癌的侵袭转移成为我们主要探讨的问题。 本研究主要探讨了p38/GSK3β通路在Livin调控乳腺癌EMT发生中的作用及机制，不仅对Livin在乳腺癌中的生物学功能的研究加以补充，而且还将为乳腺癌EMT发生机制的研究提供新思路。 目的: 1、检测Livin在乳腺癌组织和细胞系中的表达并分析其与乳腺癌临床病理特征之间的关系。 2、研究Livin对乳腺癌细胞迁移侵袭能力和EMT的影响。 3、探讨p38/GSK3β通路在Livin诱导乳腺癌EMT中的作用机制。 方法: 1、检测Livin在乳腺癌组织和细胞系中的表达并分析其与乳腺癌临床病理特征之间的关系。 (1)收集中国医科大学附属第一医院及滨州医学院附属医院病理科存档的150例乳腺癌组织（包括33例三阴性乳腺癌和117例非三阴性乳腺癌）及30例癌旁非肿瘤组织蜡块标本。另收集中国医科大学附属第一医院乳腺外科手术切除的16对新鲜原发性乳腺癌和相应癌旁非肿瘤组织标本。 (2)Western blot和Real time RT-PCR检测乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中Livin表达情况。 (3)免疫组织化学检测Livin在乳腺癌组织中的表达，分析其与乳腺癌临床病理特征之间的关系。 2、研究Livin对乳腺癌细胞迁移侵袭能力和EMT的影响 (1)在Livin相对表达量低的非三阴性乳腺癌细胞系中过表达Livin，在Livin相对表达量高的三阴性乳腺癌细胞系中敲除Livin。 (2)通过划痕实验、Transwell小室迁移和Matrigel侵袭实验探讨Livin对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。 (3)通过Western blot、免疫荧光和免疫组化实验探讨Livin对乳腺癌EMT相关分子表达的影响。 3、探讨p38/GSK3β通路在Livin诱导乳腺癌EMT中的作用机制 (1)通过Westernb lot检测乳腺癌细胞敲除或过表达Livin对p38/GSK3β通路相关分子表达的影响。 (2)通过Western blot检测加入p38和GSK3β通路抑制剂对乳腺癌细胞p38/GSK3β通路相关分子及EMT相关分子表达的影响。 结果: 1、Livin在乳腺癌组织中高表达 (1)乳腺癌组织中Livin的mRNA和蛋白表达水平均高于相应癌旁非肿瘤组织。 (2)Livin主要于乳腺癌癌细胞胞浆内呈阳性表达。Livin在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于在癌旁非肿瘤组织中的阳性表达率。 2、Livin在乳腺癌细胞系中高表达 (1)Livin在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞系中蛋白和mRNA表达水平明显高于正常乳腺上皮MCF-10A细胞系。 (2)Livin在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系中表达高于非三阴性乳腺癌MCF-7细胞系。 3、Livin表达与乳腺癌临床病理特征具有相关性 (1)Livin的阳性表达与乳腺癌（特别是三阴性乳腺癌）的高TNM分期和腋窝淋巴结转移正相关。 (2)Livin在三阴性乳腺癌组织中表达的阳性率略高于在非三阴性乳腺癌组织中表达的阳性率。 4、Livin促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭 (1)Livin过表达质粒明显增强了Livin的表达水平，Livin-siRNA干扰质粒明显抑制了Livin的表达。 (2)Livin过表达组MCF-7细胞的迁移和侵袭能力增强;而Livin干扰组MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力减弱。 5、Livin调控乳腺癌细胞EMT过程 (1)Livin过表达组的MCF-7细胞E-cadherin表达减少，而N-cadherin和Vimentin表达升高，同时伴随着Snail、MMP-2、MMP-7表达增加，而Slug表达无明显变化;而Livin干扰组的MDA-MB-231细胞E-cadherin表达上调，而N-cadherin和Vimentin表达下调，同时伴随着Snail、MMP-2、MMP-7表达降低，Slug表达也无明显变化。 (2)免疫荧光结果与Western blot结果一致，Livin过表达使MCF-7细胞的E-cadherin降低，N-cadherin和Vimentin增强;而干扰Livin则引起MDA-MB-231细胞的E-cadherin增高，N-cadherin和Vimentin降低。 (3)Livin表达与三阴性乳腺癌N-cadherin和Vimentin表达正相关，与E-cadherin表达呈负相关;Livin表达与非三阴性乳腺癌Vimentin表达正相关，与E-cadherin表达呈负相关，而与N-cadherin表达无明显相关性。 6、p38/GSK3β通路参与并影响Livin调控的乳腺癌细胞EMT过程 (1)在乳腺癌MCF-7细胞中过表达Livin后，上调了p-p38、p-ATF2和p-GSKββ的表达;而在乳腺癌MDA-MB-231细胞中干扰Livin表达后，p-p38、p-ATF2和p-GSKββ的表达降低。 (2)在乳腺癌MCF-7细胞中转染Livin后加入p38的特异性抑制剂SB203580，p-ATF2、p-GSK3β以及Vimentin和N-cadherin表达则不再上调，而E-cadherin表达也不再下调。转染Livin后加入GSK3β抑制剂SB216763，p-GSK3β、Vimentin和N-cadherin的表达进一步增加，而E-cadherin表达则明显减少。 结论: 1、Livin在乳腺癌组织和细胞系中表达增加，并与乳腺癌（尤其是三阴性乳腺癌）的侵袭转移相关。 2、Livin调控EMT过程，促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。 3、Livin通过激活p38/GSK3β通路调控乳腺癌细胞EMT过程。