癌症作为世界死因分类构成的第二类,如何预防以及更高效的治疗成为现在全世界都急于攻克的难题。癌症有多种类型,确诊后常以结合手术、化疗和放疗的方式进行治疗。临床上一般提倡化疗方案,而目前铂类药物占据临床化疗药物的50%,其中顺铂（Cisplatin,CDDP）则占临床抗癌方案的80%,是单一用药方案或与其他抗癌药物联合治疗方案中普遍使用的药物。但是CDDP也会影响正常的生理活动,甚至是对人体组织造成损伤,引起较多的副反应。环吡酮胺（Ciclopirox olamine,CPX）作为一类广谱抗菌药,对细胞膜的渗透作用极强,但临床上并未被评估为可治疗恶性肿瘤的全身性药物。本研究将CDDP与CPX联合,通过MTT还原法、细胞克隆与划痕实验、流式细胞术和免疫荧光技术,分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭,周期和凋亡以及相关蛋白的表达,研究可能发生的抗肿瘤作用机制,旨在为癌症的临床治疗提供新的有效方案。具体研究结果如下:1.CDDP联合CPX对肿瘤细胞的细胞毒性作用以及线粒体损伤相关机制研究通过MTT法,筛选出对CDDP联合CPX的药物毒性作用最敏感的细胞系A549,进一步分析药物联合指数,显示CDDP与CPX以1:10浓度比联合时二者之间存在协同作用。对细胞凋亡途径进行研究,证明CDDP联合CPX显著抑制细胞增值,对细胞DNA造成明显损伤,并使细胞周期阻滞于G1期,干扰DNA的前期合成,对线粒体功能造成障碍,诱导细胞线粒体膜电位降低、增加细胞内ROS和Ca2+水平,并降低线粒体损伤相关的凋亡通路蛋白Bcl-2/Bax的比例。2.CDDP联合CPX对氧化应激途径引起的细胞凋亡机制研究通过NAC抑制氧化应激后对药物联合作用的细胞存活率进行分析,MTT结果表明,CDDP与CPX以1:10摩尔比联合,通过抑制氧化应激途径提高了A549细胞的存活率,并使细胞内ROS含量显著下降。此外,药物联合造成细胞内脂质过氧化,其终产物MDA含量最高可达59.13μM,并引起细胞内活性氮的积累,NO含量高达26.99μM。进一步对细胞内抗氧化因子检测,总谷胱甘肽含量显著下降,最低仅为14.5μM,而抗氧化酶SOD活性也被显著抑制,酶活力最低为27.8 U。对氧化应激Nrf2信号通路的蛋白免疫印实验表明,药物联合使Nrf2蛋白水平显著下调。3.CDDP联合CPX对内质网应激和自噬途径引起的细胞凋亡机制研究通过4-PBA抑制内质网应激后对药物联合作用的细胞存活率进行分析,结果表明,细胞活力的变化与药物作用于细胞的时间相关,短时间内促进细胞存活,而长时间可激活内质网应激凋亡信号。进一步对细胞内钙离子水平检测,结果表明抑制内质网应激可抑制药物联合引起的钙离子水平上调,上调内质网应激凋亡信号通路PERK/ATF4/CHOP的蛋白表达水平。此外,药物联合可引起细胞自噬,通过自噬清除细胞内的代谢产物来提高其存活率,诱导细胞形成自噬小体。综上,CDDP与CPX联合对A549细胞存在协同抗肿瘤作用,通过调节细胞凋亡相关的Bcl-2家族蛋白的表达对线粒体功能造成障碍。同时诱导A549细胞内的氧化还原状态失衡,引起细胞氧化应激造成细胞凋亡。此外,细胞内的强氧化状态可引起细胞内质网应激来调节细胞的存活,通过降低自噬水平可增强细胞对CDDP和CPX的药物敏感性。