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目的：明确两例遗传性FⅪ缺陷症的基因突变类型，结合患者及其家庭成员的实验室表型结果，初步探讨其分子发病机制。 方法： 1.研究对象: 家系1，先证者，女，39岁，因宫颈息肉手术来我院检查发现其凝血功能异常，该家系三代共5名成员，包括其母亲，姐姐，弟弟和女儿，先证者父母为近亲结婚。家系2，先证者，女，32岁，妊娠入院，凝血常规检查结果异常，该家系三代共8人，包括其父亲、母亲、姐姐、弟弟、女儿、侄子和外甥女，父母非近亲结婚。正常对照:健康检查者150名，男性88名，女性62名。平均年龄43岁，无出血史和血栓史。 2.家系成员及对照组标本采集 经患者及其家系成员知情同意后，采集各家系成员外周静脉血标本，用0.109mol/L枸橼酸钠1∶9抗凝，4℃3000r/min离心15min后，上层乏血小板血浆用于检测凝血指标，下层血细胞用于提取基因组DNA，于-40℃保存待用。对照组采血及处理同上。 3.表型检测 在STA-R全自动血凝仪上采用一期凝固法检测患者及其家系成员的凝血功能，包括活化部分凝血活酶时间（Activated Partial Thromboplastin Time，APTT）、凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、凝血因子Ⅷ活性(coagulation factorⅧactivity,FⅧ:C)、凝血因子Ⅸ活性(coagulation factorⅨactivity，FⅨ:C)、FⅪ:C、凝血因子Ⅻ活性(coagulation factorⅫactivity,FⅫ:C)，纤维蛋白原（fibrinogen，FIB），用免疫比浊法检测血管性血友病因子(Von willebrand factor，vWF)，用ELISA法检测凝血因子Ⅸ抗原(coagulation factorⅪ antigen，FⅪ:Ag)。 4.基因分析 依据FⅪ基因在Genbank中的参考序列编码X68793.1，用Primer Premier6.0TM软件设计15对引物。采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)，对FⅪ基因14对外显子，5、3非编码区及其侧翼序列进行扩增，将扩增产物纯化后直接测序，将测序结果与美国国立生物信息中心(NCBI，National Center forBiotechnology Information)的FⅪ基因序列进行比对，找寻基因突变位点。 5.利用生物信息学软件对突变位点的生物信息学特性进行分析 ①利用PolyPhen-2、SIFT以及Mutation Taster三个在线程序评价和预测错义突变位点对蛋白功能产生的影响，给出评估值。用Mutation Taster程序评价和预测无义突变对蛋白功能造成的影响，给出评估值。 ②根据蛋白质数据库PDB（http://www.rcsb.org/pdb）提供的蛋白空间结构模型用SPDBV软件分析突变前后蛋白空间模型发生的变化，进行对比分析。 ③采用ClustalⅩ软件对突变位点在生物进化中延续的保守性进行分析。 结果： 先证者1的APTT为78.4s，FⅪ:C和FⅪ:Ag明显降低，分别为4.0％和6.8％;其弟弟、母亲、姐姐和女儿的FⅪ:C分别为5.3％、67.9％、63.4％和42.3％，FⅪ:Ag水平分别为8.0％、53.0％、57.0％和51.0％。基因测序发现其FⅪ基因7号外显子存在g.19134C＞T纯合突变，导致p.Gln263stop，同样纯合突变亦可见于其弟弟;家系成员中，其母亲、姐姐、女儿均为p.Gln263stop杂合突变。 先证者2的APTT为60.6s，FⅪ:C与FⅪ:Ag分别为2.0％及17.6％;其父亲、母亲、姐姐、弟弟、女儿、侄子和外甥女FⅪ:C分别为49.0％、38.0％、58.0％、4.5％、24.0％、36.0％和59.0％，FⅪ:Ag水平分别为72.0％、25.0％、80.0％、20.5％、47.0％、36.5％和83.0％。基因测序发现先证者FⅪ基因6号外显子和12号外显子分别存在g.15410G＞A和g.25471C＞G杂合突变，导致p.Trp228stop及p.Cys482Trp;家系成员中，其弟弟同样携带该复合杂合突变，其父亲、姐姐、外甥女携带p.Trp228stop突变，其母亲、女儿及侄儿携带p.Cys482Trp突变。 对错义突变p.Cys482Trp进行分析，PolyPhen-2评分为1.000，显示为有害突变;SIFT评分为0.00，显示为影响蛋白质的功能;Mutation Taster预测结果为能够引起相应疾病。对无义突变Trp228stop和Cys482stop进行分析，MutationTaster预测结果为能引起相应疾病。SPDBV模型分析软件分析结果表明，错义突变p.Cys482Trp不会改变蛋白内氢键连接，但会干扰二硫键连接并与邻近氨基酸形成空间位阻，对蛋白性能可能产生影响。ClustalⅩ软件分析显示Trp228、 Gln263残基及Cys482残基在生物进化中保守。 结论： 1、两例遗传性FⅪ缺陷症患者表型结果均为Ⅰ型，即交叉反应物质阴性（CRM）型。 2、先证者1，FⅪ基因存在p.Gln263stop纯合突变，该突变遗传自近亲结婚的父母;先证者2，FⅪ基因存在p.Trp228stop和p.Cys482Trp复合杂合突变，其中p.Trp228stop突变遗传自父亲，p.Cys482Trp突变遗传自母亲。 3、先证者1，FⅪ水平降低与FⅪ基因p.Gln263stop纯合突变有关;先证者2，FⅪ水平降低与FⅪ基因p.Trp228stop和p.Cys482Trp复合杂合突变有关。