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全球癌症的发病率与死亡率逐年增加,已经成为了人们在70岁前死亡的第一或第二原因。近年来,随着医学的进步,免疫疗法在癌症治疗中成为了继手术、放疗、化疗、靶向治疗之后的新起之秀,肿瘤疫苗——免疫疗法的重要部分,用肿瘤特异抗原或肿瘤相关抗原免疫机体,使宿主以主动免疫的方式调动免疫系统达到抗肿瘤的目的。对肿瘤疫苗有效性影响较大的因素主要有三个,即抗原选择,疫苗类型,免疫策略。大量研究证实MUC1和survivin是理想的肿瘤抗原。本课题组前期构建了基于MUC1和survivin双靶点的DNA与痘病毒载体（MVA）形式的疫苗。MVA（modifiedvaccinia virus Ankara）即改良型痘苗病毒安卡拉株,是在寻求痘病毒作为天花病毒的疫苗中获得的高度减毒的痘苗毒株,它具有安全性高、天然佐剂效应等优点。本课题组前期开发了 DNA疫苗快速免疫策略,即在第0,2,5天进行DNA疫苗快速免疫（0/2/5）,该免疫策略可以招募更多的树突状细胞（dendritic cell,DCs）到注射部位,并提高了疫苗的提呈效率,诱导了更强的免疫应答;同时在快速免疫策略末次免疫后一周,使用rMVA疫苗加强,即DNA Prime-rMVAboost策略诱导了更强的抗肿瘤免疫。但是考虑到多种疫苗的制备、保存及临床用药便捷性问题以及新型DNA快速免疫策略的优势,在本论文中,我们对DNA疫苗同源prime-boost免疫策略进行优化并与痘病毒异源prime-boost免疫策略对比,结果表明优化后DNA同源prime-boost策略其抗肿瘤效果依然低于DNA Prime-rMVA Boost策略。为了进一步提高疫苗的治疗效果,使用具有抗肿瘤能力与消除MDSC能力的化药吉西他滨（Gemcitabine;G）和顺铂（Cisplatin;C）与肿瘤疫苗联合,结果显示化药联合DNA prime-rMVAboost免疫策略进一步增强了疫苗的抗肿瘤效果。首先,在DNA疫苗快速免疫策略的基础上,对DNA疫苗同源prime-boost策略进行了研究。该部分研究了靶向MUC1和survivin的DNA疫苗自身的多针次加强是否能达到和DNA prime-rMVA boost相当水平的免疫应答,并有良好的抗肿瘤效果。在三针DNA疫苗快速免疫策略（0/2/5）的基础上设计不同针次与不同轮次的DNA同源prime-boost免疫策略,结果显示:相较于其他同源prime-boost免疫策略,3D（0/2/5）+2D（0/2）（3D+2D）免疫策略诱导了最强的免疫应答,并且与3D（0/2/5）+rMVA（3D+M）相比,3D+2D诱导了更高的CD4+T细胞水平,但3D+2D在诱导CD8+T与增殖性CD8+T以及CD8+T细胞分泌IFN-γ能力方面效果不及3D+M免疫策略。其次,因为DNA疫苗同源prime-boost免疫策略与异源免疫策略在一些方面仍有可比性。因此,想进一步探索二者在抗肿瘤活性方面的效果。本部分实验采用肺癌小鼠模型进行研究,结果显示相较于对照组（vehicle）,两种免疫策略抑瘤率分别为48.4%与68%,3D+2D免疫策略相较于3D+M免疫策略的抗肿瘤效果仍有一定差异。最后,选取了效果更佳的异源免疫策略与化药联合使用,进一步增强疫苗的效果。研究证明用于非小细胞肺癌治疗的吉西他滨（Gemcitabine;G）和顺铂（Cisplatin;C）具有减少瘤内髓源性抑制细胞（MDSC）的能力,期望肿瘤疫苗与该化药联用共同治疗恶性肿瘤,能够有更好的肿瘤治疗效果。在吉西他滨和顿铂（GC）与3D+M免疫策略联用试验中,GC+（3D+M）联合治疗组较3D+M组和GC组有更好的抗肿瘤效果,并且极大的促进了 T细胞的瘤内浸润,提高了脾内IFN-γ+CD8+T细胞含量,同时化药降低了瘤内MDSC含量,进一步提高了肿瘤疫苗的治疗效果。综上,双靶点肿瘤疫苗使用时,在DNA同源免疫策略的各个优化组中,3D+2D免疫策略表现出最强的免疫应答,但与3D+M免疫策略相比,3D+M能激起更强的免疫原性且有更好的肿瘤治疗效果,与吉西他滨和顺铂联合应用后,抗肿瘤效果得到显著提升,其机制为,提高了脾内IFN-γ+CD8+T细胞含量,增强了 CD8+T细胞抗肿瘤活性,促进了 T细胞的瘤内浸润,同时抑制了瘤内MDSC的比例。