处红柚和翡翠柚杂交F1后代分子评价及类黄酮组成分析

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杂交不仅是柑橘育种的重要方法,同时也常用于遗传图谱的构建、GBS定位、QTL定位等研究中,进行基因挖掘。为了探究类黄酮在群体遗传中的规律以及挖掘代谢网络中的关键基因,课题组于2012年创建了处红柚(Citrus grandis cv.Chuhongyou)和翡翠柚(C.grandis cv.Feicuiyou)的杂交群体,在前人基础上,本研究对部分群体材料进行杂种鉴定、类黄酮分析以及对其中一株早花突变体初步探究,主要研究结果如下:1.通过筛选出的Ma6-64、Ma3-104、Ma3_198、Csin.0495和Ma3-954共5对SSR引物对处红柚与翡翠柚所有子代进行杂种鉴定,从正交CF群体952棵实生苗中鉴定出823棵真杂种,从反交FC群体93棵实生苗中鉴定出83棵真杂种,正反交群体的真杂种率为86.7%,用于进一步研究。2.HPLC分析处红柚、翡翠柚及其杂交子代春梢成龄叶中的14种类黄酮,结合标准品辅助定性初步确定了柚皮苷和野漆树苷2种类黄酮,进一步通过LC-MS分析,W1、W3、W4、W6和W9推测均是芹菜素糖苷类化合物。其中W1、W3的m/z分别为595、565,推测二者分别为芹菜素-6,8-二-C-己糖苷和芹菜素-8-C-葡萄糖-O-戊糖苷。3.HPLC定量分析发现,处红柚与翡翠柚杂交子代春梢成龄叶冻干样品(DW)中的类黄酮的含量呈非正态分布,可能是由主效基因和微效多基因共同调控的结果。子代叶片中最主要的类黄酮是柚皮苷和野漆树苷,它们的含量分布范围分别为112.45~15118.44μg/g、73.70~9496.94μg/g,变异系数分别为156%、59%,子代平均含量为1431.49μg/g、3118.13μg/g,遗传传递力分别为168.47%、120.14%;与亲本相比,柚皮苷的含量在子代中有降低的趋势,野漆树苷的含量在子代中有升高的趋势。4.通过主成分(PCA)和聚类分析发现,在CF群体中类黄酮在子代遗传偏向处红柚(母本),并筛选出CF803、CF907、CF527、CF534、CF563、CF579、CF586等特殊种质材料。5.针对群体中的一株早花变异,克隆了ELF3、AP1、SOC1、LFY、TFL1和SVP早花性状相关基因,通过c DNA/DNA序列比对发现,相较非早花植株而言,早花柚中ELF3存在特异的转录本,其对应氨基酸序列也存在差异。
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