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目的猴头菌素是从药用蘑菇猴头菌中提取的,已有研究证明猴头菌素在抗人类癌症中起作用。本研究旨在证明猴头菌素能够通过抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路诱导人肝细胞癌(Human Hepatocellular Carcinoma,HCC)Hep G-2细胞线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial Permeability Transition Pore,m PTP)开放,从而促进Hep G-2细胞凋亡,同时强调猴头菌素在人肝细胞癌治疗中的适用性。方法本实验选用从美国模式培养物集存库(American Type Culture Collection,ATCC)购买的人肝细胞癌组织来源的Hep G2细胞为研究对象。首先为了探讨不同浓度猴头菌素(100μM、300μM、500μM)和1μM LY294002(PI3K/Akt/GSK-3β信号通路抑制剂)以及500μM猴头菌素+1μM LY294002的组合能否抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路以及抑制程度,应用RT-q PCR技术和Western blot技术检测PI3K、Akt、GSK-3β的相对m RNA及蛋白表达水平以及磷酸化水平;然后探讨了猴头菌素能否诱导线粒体膜通透性转移孔(m PTP)的开放,上述5组实验组以及500μM猴头菌素+Cs A(m PTP开放抑制剂)组Hep G-2细胞应用JC-1染料进行荧光染色并通过激光扫描共聚焦显微镜成像法测定红色/绿色荧光强度比率来判断细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,?Ψm)的变化,进而判断m PTP的开放程度;最后为了探讨猴头菌素对Hep G-2细胞的生长是否产生抑制作用以及抑制程度,应用MTT法、伤口愈合试验以及流式细胞术分别检测细胞活力、细胞迁移能力以及细胞周期和细胞凋亡情况。结果1不同浓度猴头菌素或LY294002降低了PI3K、Akt、GSK-3β的m RNA和蛋白表达水平以及磷酸化水平(P<0.05),提示猴头菌素能够失活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路;2不同浓度猴头菌素或LY294002能使Hep G2细胞红色/绿色荧光强度比率降低,与500μM猴头菌素相比,500μM猴头菌素+Cs A(m PTP开放抑制剂)组的红色/绿色荧光强度比率显著增加(P<0.05),表面猴头菌素能够降低线粒体膜电位,提示猴头菌素能够通过失活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路诱导m PTP开放;3不同浓度猴头菌素或LY294002增加了Hep G2细胞的抑制率(P<0.05),提示猴头菌素能够抑制细胞增殖;不同浓度猴头菌素或LY294002降低了Hep G2细胞迁移率(P<0.05),提示猴头菌素能够抑制细胞迁移;不同浓度猴头菌素或LY294002使Hep G2细胞在G1期细胞数量增加而在S期细胞数量减少,同时细胞凋亡率增加(P<0.05),提示猴头菌素能够抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡;4猴头菌素以浓度依赖性方式起作用,浓度越高,作用越强,并且猴头菌素能够增强LY294002的作用效果。结论本研究的结论是猴头菌素能够通过失活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路来诱导线粒体膜通透性转移孔的开放,抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,从而阻止肝细胞癌的进展。图13幅;表2个;参167篇。