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目的:急性肝衰竭是发生极为迅速,预后极差的肝脏疾病,目前未有对患者起到有效作用的治疗方法。根据前期研究,我们认为张仲景所著《伤寒论》麻黄连翘赤小豆汤证可能为急性重症黄疸,即急性肝衰竭。麻黄和连翘共为该方剂的君药,传统认为麻黄连翘这组药对具有发汗解表,清热解毒的作用。伪麻黄碱是麻黄与连翘中最为特异的有效成分,连翘精油是连翘的精油提取物。我们改进了麻黄连翘这组药对,将伪麻黄碱以及连翘精油作为复方制剂,命名为“麻黄连翘合剂”。本研究考察麻黄连翘合剂在急性肝衰竭中的治疗效果,并且进一步研究了伪麻黄碱和连翘精油有效成分连翘苷的作用机制。方法:1.使用麻黄连翘水提物（麻黄、连翘均为3.6 g/kg）灌胃雄性Wistar大鼠,连续5天。通过腹腔注射D-Gal N/LPS（300 mg/kg,40 ug/kg）建立急性肝衰竭大鼠模型。检测模型建立后1 h大鼠血清TNF-α表达情况,以及模型建立后12 h大鼠肝功能（ALT、TBIL）情况。2.使用连翘精油（500 mg/kg）灌胃雄性Wistar大鼠,连续7天。通过腹腔注射DGal N/LPS（340 mg/kg,40 ug/kg）建立急性肝衰竭大鼠模型,同时腹腔注射伪麻黄碱（30 mg/kg）进行干预。观察大鼠生存率,检测模型建立后1 h大鼠血清TNF-α表达情况,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定连翘精油中连翘苷含量。3.通过腹腔注射D-Gal N/LPS（300 mg/kg,40 ug/kg）建立急性肝衰竭大鼠模型,同时腹腔注射连翘苷（45或90 mg/kg）进行干预。检测模型建立后1 h大鼠血清TNF-α表达情况,检测模型建立后8 h大鼠肝功能（ALT、TBIL）、大鼠肝组织Caspase-3活性。对大鼠肝脏进行H＆E染色和TUNEL染色,观察组织学变化。通过Western blot检测大鼠肝脏组织Cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2、P-AMPK、PAKT蛋白表达情况。4.使用胶原酶灌注法从雄性Wistar大鼠肝脏分离原代肝细胞,通过TNF-α/Act D（20 mg/m L,200 ng/m L）刺激建立原代大鼠肝细胞凋亡模型,使用连翘苷（100u M）以及AMPK抑制剂或AKT抑制剂干预,通过TUNEL染色以及Annexin VPI流式细胞术检测原代大鼠肝细胞凋亡情况,使用Western blot检测原代肝细胞Cleaved-caspase-3、P-AMPK、P-AKT蛋白表达情况。通过腹腔注射D-Gal N/LPS（300 mg/kg,40 ug/kg）建立急性肝衰竭大鼠模型,同时腹腔注射连翘苷（90 mg/kg）以及AMPK抑制剂或AKT抑制剂进行干预。检测模型建立后8 h大鼠肝功能（ALT、AST、TBIL）情况。对大鼠肝脏进行H＆E染色和TUNEL染色,观察组织学变化。通过Western blot检测大鼠肝脏组织P-AMPK、P-AKT蛋白表达情况。5.使用胶原酶灌注法从雄性Wistar大鼠肝脏分离原代肝细胞,通过TNF-α/Act D（20 mg/m L,200 ng/m L）刺激建立原代大鼠肝细胞凋亡模型,使用伪麻黄碱（100u M）以及JNK激动剂干预,通过TUNEL染色以及Annexin V-PI流式细胞术检测原代大鼠肝细胞凋亡情况,通过Western blot检测P-JNK、Cleaved-caspase-3蛋白表达情况。结果:1.麻黄连翘水提物减轻了急性肝衰竭大鼠的肝功能（ALT、TBIL）损伤,抑制了急性肝衰竭大鼠血清TNF-α的表达。2.麻黄连翘合剂（伪麻黄碱和连翘精油）显著提高了急性肝衰竭大鼠的生存率,效果显著优于单用伪麻黄碱。连翘精油对大鼠血清TNF-α无显著影响。高效液相色谱法（HPLC）鉴定出连翘苷是连翘精油中重要的活性成分。3.连翘苷减轻了急性肝衰竭大鼠的肝功能（ALT、TBIL）损伤,但对大鼠血清TNF-α无显著影响。连翘苷减少了大鼠肝脏TUNEL染色阳性细胞数,抑制了肝组织Caspase-3活性。连翘苷干预增强了大鼠肝脏AMPK以及AKT磷酸化,增加了Bcl-2/BAX比率,减少了Cleaved-caspase-3的表达。4.连翘苷减轻了TNF-α/Act D诱导的原代大鼠肝细胞凋亡。连翘苷降低了TUNEL染色和Annexin V-PI中凋亡细胞的比率。连翘苷增强了原代肝细胞AMPK以及AKT磷酸化,减少了Cleaved-caspase-3表达。抑制AMPK或抑制AKT均部分减弱了连翘苷对大鼠原代肝细胞凋亡的保护作用。抑制AMPK或抑制AKT,部分减弱了连翘苷对急性肝衰竭大鼠的保护作用。此外,AMPK抑制剂抑制了连翘苷干预导致的AKT磷酸化。5.伪麻黄碱增加了TNF-α/Act D诱导的原代大鼠肝细胞的存活率,降低了TUNEL染色和Annexin V-PI中凋亡细胞的比率。伪麻黄碱抑制了JNK的激活以及Cleavedcaspase-3的表达。JNK激活剂部分减弱了伪麻黄碱对原代大鼠肝细胞凋亡的保护作用。结论:1.麻黄连翘药对能显著减轻D-Gal N/LPS诱导的急性肝衰竭大鼠肝损伤。2.麻黄连翘合剂（伪麻黄碱和连翘精油）能显著改善D-Gal N/LPS诱导的急性肝衰竭大鼠肝损伤,是治疗急性肝衰竭有前景的复方制剂,可供临床借鉴。3.连翘苷是连翘精油中发挥抗急性肝衰竭作用的重要有效成分。4.连翘苷通过AMPK/AKT途径,在急性肝衰竭中保护肝细胞免受凋亡。5.伪麻黄碱通过抑制JNK活化,在急性肝衰竭中保护肝细胞免受凋亡。