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研究目的:
端粒缩短是反应细胞衰老的生物学标志物，研究显示，慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃黏膜端粒长度较同龄正常人缩短，提示CAG或与胃黏膜衰老有关，然相关分子机制尚未阐明。既往临床研究证实，导师根据“胃天年”理论运用固本通络汤治疗CAG在临床上具有较好的疗效，然固本通络汤疗效发挥的机制尚不明确。本研究通过对CAG患者胃黏膜端粒长度与端粒结合蛋白TRF1、TRF2、POT1mRNA及蛋白表达水平、细胞衰老通路关键因子p53mRNA表达水平的研究，从端粒调控网络与衰老角度探讨CAG的发病机制以及固本通络汤治疗CAG的机制。
研究方法:
(1)CAG患者胃黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POT1mRNA及蛋白表达与p53mRNA表达水平的病例-对照研究
采用病例对照研究的实验设计，收取30例CAG患者及30例CNAG患者作为对照组，所有患者均于中国中医科学院广安门医院行胃镜检查及病理活检，明确诊断。通过填写调查问卷以确定两组患者疾病发生的危险因素，通过检测患者胃窦部黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POTlmRNA及蛋白表达以及细胞衰老通路关键因子p53mRNA表达，探讨人胃黏膜端粒调控网络及衰老与CAG的相关性，以进一步明确CAG发病的分子机制。
(2)固本通络汤治疗CAG的机制研究
采用自身前后对照的实验设计，回顾性的收取经固本通络汤治疗3个月后胃窦部黏膜病理至少改善一个等级的患者30例，对其治疗前后的胃窦部病理标本进行再切片，通过检测胃窦部黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POTlmRNA及蛋白表达以及细胞衰老通路关键因子p53mRNA表达，探讨固本通络汤对端粒调控网络及细胞衰老通路关键基因p53的影响，从而明确固本通络汤疗效发挥的机制。
研究结果:
(1)CAG患者胃黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POT1mRNA及蛋白表达与p53mRNA表达水平的病例-对照研究
两组患者基线比较:性别、年龄组成无明显差异，基线一致，具有可比性。
两组患者相关危险因素比较:与CNAG组相比，CAG患者中有Hp感染史者更多、病程更长，差异有统计学意义（P＜0.05）;BMI、吸烟史、饮酒史、熬夜、暴饮暴食、喜食辛辣刺激、生冷及高盐饮食、胃癌家族史及现症感染Hp等危险因素差异均无统计学意义。
两组患者病理情况比较:CAG组患者中，伴萎缩22例（占73.3％）、伴肠化29例（占96.7％）、伴异型增生1例（占3.3％），两组患者胃黏膜病理积分有明显差异(t’=9.682，P＜0.O01)。
两组患者胃黏膜端粒长度比较:两组患者胃黏膜相对端粒长度均不符合正态分布，CAG组相对端粒长度中位数为0.67，CNAG组相对端粒长度中位数为1.06，CAG组较CNAG组相对端粒长度短，差异有统计学意义(U=297.000，P=0.024)两组患者胃黏膜TRF1、TRF2、POTlmRNA及蛋白表达水平的比较:胃黏膜TRF1mRNA在CNAG组高表达，但差异无统计学意义（t=0.788，P=0.434）;TRF2mRNA在CAG组高表达，但差异无统计学意义(t=1.969，P=0.054);POT1mRNA在CNAG组高表达，但差异无统计学意义(t’=-1.225，P=0.226);TRF1、TRF2、POT1蛋白在CAG组均高表达，与CNAG组比较差异显著，有统计学意义（P＜0.01）。
两组患者胃黏膜p53mRNA表达水平的比较:p53mRNA在CAG组高表达，但差异无统计学意义(t=0.260，P=0.796)。
胃黏膜端粒长度与年龄的相关性分析:CAG组及CNAG组胃黏膜端粒长度与年龄均无相关性（CAG组:r=-0.303，P=0.131;CNAG组:F=-0.195，P=0.302）
胃黏膜端粒长度与TRF1、TRF2、POT1、p53mRNA及TRF1、TRF2、POT1蛋白表达的相关性分析:CAG组p53mRNA表达水平与胃黏膜端粒长度存在轻度负相关(F=-0.396，P=0.031)，回归方程Y=-0.321X+1.099（F=3.438，P=0.074），提示该回归方程无统计学意义，因而不能用p53mRNA表达水平预测CAG胃黏膜端粒长度，CNAG组胃黏膜端粒长度与TRF1、TRF2、POT1及p53mRNA水平均无相关性;CAG组TRF2、POT1蛋白表达量与胃黏膜端粒长度呈负相关，其中TRF2蛋白表达量与端粒长度的线性回归方程为Y=-0.041X+1.249(F=1.741，P=0.198)，提示该回归方程无统计学意义，不能用TRF2蛋白表达量预测CAG胃黏膜端粒长度，POT1蛋白表达量与端粒长度的线性回归方程为Y=-0.103X+1.272(R2=0.206，F=7.249，P=0.012)，CNAG组胃黏膜端粒长度与TRF1、TRF2、POT1蛋白表达量均无相关性。
胃黏膜病理积分与胃黏膜相对端粒长度、TRF1、TRF2、POT1、p53mRNA表达水平及TRF1、TRF2、POT1蛋白表达水平的相关性:60例受试者胃黏膜病理积分与胃黏膜相对端粒长度呈负相关（r=-0.410，P=0.O01），线性回归方程为Y=-5.018X+11.54(R2=0.181，F=12.81，P＜0.001);胃黏膜病理积分与TRF1mRNA表达水平无相关性（F=-0.054，P=0.682），与TRF2mRNA表达水平呈正相关（r=0.339，P=0.008），与POT1mRNA表达水平无相关性（r=0.052，P=0.695），与p53mRNA表达水平亦无相关性（r=0.037，P=0.778);胃黏膜病理积分与TRF1、TRF2、POT1蛋白表达量均呈正相关，与TRF1蛋白表达量回归方程为Y=1.974X+0.534（R2=0.437，F=45.04，P＜0.001），与TRF2蛋白表达量回归方程为Y=0.848X-1.457（R2=0.138，F=9.312，P=0.003），与POT1蛋白表达量回归方程为Y=1.743X+0.814(R2=0.294,F=24.15,P＜0.001)。
CAG发病的多因素Logistic回归分析:TRF1与POT1蛋白表达阳性为CAG的独立危险因素，TRF1蛋白表达阳性者发生CAG的风险是阴性者的16.54倍(95％CI:1.84-149.03)，POT1蛋白表达阳性者发生CAG的风险是阴性者的9.11倍(95％CI:1.64-50.54)。
(2)固本通络汤治疗CAG的机制研究
治疗前后病理资料比较:萎缩、肠化、慢性炎症治疗前后的构成比差异显著，具有统计学意义(P＜0.01);萎缩、肠化治疗前后积分及治疗前后总积分差异显著，具有统计学意义（P＜0.001）;慢性炎症治疗前后积分无明显差异(P＞0.05);异型增生病例数仅为1例，因而治疗前后差异无统计学意义。
研究结论:
我们通过对CAG患者胃黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POT1mRNA及蛋白表达与p53mRNA表达水平的病例.对照研究发现:
(1)CAG患者胃黏膜端粒长度较CNAG患者缩短，端粒的缩短与CAG的发生密切相关。
(2)CAG患者胃黏膜TRF1、TRF2、POT1蛋白表达量显著高于CNAG患者;CAG患者胃黏膜TRF2、POT1蛋白表达量与胃黏膜端粒长度呈负相关，考虑CAG患者胃黏膜端粒缩短与TRF2、POT1蛋白的过表达有关。
(3)CAG患者的p53mRNA表达水平与胃黏膜端粒长度存在轻度负相关，CAG患者中端粒长度缩短伴随着p53mRNA表达增高，初步考虑为p53通路的激活以介导细胞衰老，防止端粒过短被识别为DNA损伤，引起染色体不稳定而发生癌变，有待进一步研究证实。
(4)本研究60例受试者胃黏膜病理积分与胃黏膜相对端粒长度呈负相关，与TRF2mRNA表达水平及TRF1、TRF2及POT1蛋白表达量均呈正相关，且有统计学意义，因此胃黏膜端粒长度、TRF2mRNA表达水平、TRF1、TRF2、POT1蛋白表达量均可以预测胃黏膜的病变程度。
(5)TRF1和POT1蛋白表达阳性是CAG的独立危险因素，TRF1蛋白表达阳性者发生CAG的风险是阴性者的16.54倍，POT1蛋白表达阳性者发生CAG的风险是阴性者的9.11倍。临床上对胃黏膜TRF1及POT1蛋白的免疫组化检测可作为CAG诊断和预后的参考指标。
通过对固本通络汤治疗后胃黏膜病理改善者的自身前后对照研究发现:
(1)固本通络汤治疗前后胃黏膜相对端粒长度无明显差异，尚不能说明固本通络汤对胃黏膜端粒长度有影响。
(2)固本通络汤可以下调TRF1mRNA的表达水平。
(3)固本通络汤治疗前后TRF1、TRF2、POT1蛋白表达无明显差异，尚不能说明固本通络汤对TRF1、TRF2、POT1蛋白表达有影响。
(4)固本通络汤可以下调p53mRNA表达水平，初步考虑固本通络汤可能是通过延缓端粒缩短的速度，为DNA损伤修复机制提供机会，阻断p53介导细胞衰老通路的激活，从而达到延缓胃衰老、逆转CAG的作用，然其机制尚有待于进行细胞体外和动物体内实验做进一步的验证。
端粒缩短是反应细胞衰老的生物学标志物，研究显示，慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃黏膜端粒长度较同龄正常人缩短，提示CAG或与胃黏膜衰老有关，然相关分子机制尚未阐明。既往临床研究证实，导师根据“胃天年”理论运用固本通络汤治疗CAG在临床上具有较好的疗效，然固本通络汤疗效发挥的机制尚不明确。本研究通过对CAG患者胃黏膜端粒长度与端粒结合蛋白TRF1、TRF2、POT1mRNA及蛋白表达水平、细胞衰老通路关键因子p53mRNA表达水平的研究，从端粒调控网络与衰老角度探讨CAG的发病机制以及固本通络汤治疗CAG的机制。
研究方法:
(1)CAG患者胃黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POT1mRNA及蛋白表达与p53mRNA表达水平的病例-对照研究
采用病例对照研究的实验设计，收取30例CAG患者及30例CNAG患者作为对照组，所有患者均于中国中医科学院广安门医院行胃镜检查及病理活检，明确诊断。通过填写调查问卷以确定两组患者疾病发生的危险因素，通过检测患者胃窦部黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POTlmRNA及蛋白表达以及细胞衰老通路关键因子p53mRNA表达，探讨人胃黏膜端粒调控网络及衰老与CAG的相关性，以进一步明确CAG发病的分子机制。
(2)固本通络汤治疗CAG的机制研究
采用自身前后对照的实验设计，回顾性的收取经固本通络汤治疗3个月后胃窦部黏膜病理至少改善一个等级的患者30例，对其治疗前后的胃窦部病理标本进行再切片，通过检测胃窦部黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POTlmRNA及蛋白表达以及细胞衰老通路关键因子p53mRNA表达，探讨固本通络汤对端粒调控网络及细胞衰老通路关键基因p53的影响，从而明确固本通络汤疗效发挥的机制。
研究结果:
(1)CAG患者胃黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POT1mRNA及蛋白表达与p53mRNA表达水平的病例-对照研究
两组患者基线比较:性别、年龄组成无明显差异，基线一致，具有可比性。
两组患者相关危险因素比较:与CNAG组相比，CAG患者中有Hp感染史者更多、病程更长，差异有统计学意义（P＜0.05）;BMI、吸烟史、饮酒史、熬夜、暴饮暴食、喜食辛辣刺激、生冷及高盐饮食、胃癌家族史及现症感染Hp等危险因素差异均无统计学意义。
两组患者病理情况比较:CAG组患者中，伴萎缩22例（占73.3％）、伴肠化29例（占96.7％）、伴异型增生1例（占3.3％），两组患者胃黏膜病理积分有明显差异(t’=9.682，P＜0.O01)。
两组患者胃黏膜端粒长度比较:两组患者胃黏膜相对端粒长度均不符合正态分布，CAG组相对端粒长度中位数为0.67，CNAG组相对端粒长度中位数为1.06，CAG组较CNAG组相对端粒长度短，差异有统计学意义(U=297.000，P=0.024)两组患者胃黏膜TRF1、TRF2、POTlmRNA及蛋白表达水平的比较:胃黏膜TRF1mRNA在CNAG组高表达，但差异无统计学意义（t=0.788，P=0.434）;TRF2mRNA在CAG组高表达，但差异无统计学意义(t=1.969，P=0.054);POT1mRNA在CNAG组高表达，但差异无统计学意义(t’=-1.225，P=0.226);TRF1、TRF2、POT1蛋白在CAG组均高表达，与CNAG组比较差异显著，有统计学意义（P＜0.01）。
两组患者胃黏膜p53mRNA表达水平的比较:p53mRNA在CAG组高表达，但差异无统计学意义(t=0.260，P=0.796)。
胃黏膜端粒长度与年龄的相关性分析:CAG组及CNAG组胃黏膜端粒长度与年龄均无相关性（CAG组:r=-0.303，P=0.131;CNAG组:F=-0.195，P=0.302）
胃黏膜端粒长度与TRF1、TRF2、POT1、p53mRNA及TRF1、TRF2、POT1蛋白表达的相关性分析:CAG组p53mRNA表达水平与胃黏膜端粒长度存在轻度负相关(F=-0.396，P=0.031)，回归方程Y=-0.321X+1.099（F=3.438，P=0.074），提示该回归方程无统计学意义，因而不能用p53mRNA表达水平预测CAG胃黏膜端粒长度，CNAG组胃黏膜端粒长度与TRF1、TRF2、POT1及p53mRNA水平均无相关性;CAG组TRF2、POT1蛋白表达量与胃黏膜端粒长度呈负相关，其中TRF2蛋白表达量与端粒长度的线性回归方程为Y=-0.041X+1.249(F=1.741，P=0.198)，提示该回归方程无统计学意义，不能用TRF2蛋白表达量预测CAG胃黏膜端粒长度，POT1蛋白表达量与端粒长度的线性回归方程为Y=-0.103X+1.272(R2=0.206，F=7.249，P=0.012)，CNAG组胃黏膜端粒长度与TRF1、TRF2、POT1蛋白表达量均无相关性。
胃黏膜病理积分与胃黏膜相对端粒长度、TRF1、TRF2、POT1、p53mRNA表达水平及TRF1、TRF2、POT1蛋白表达水平的相关性:60例受试者胃黏膜病理积分与胃黏膜相对端粒长度呈负相关（r=-0.410，P=0.O01），线性回归方程为Y=-5.018X+11.54(R2=0.181，F=12.81，P＜0.001);胃黏膜病理积分与TRF1mRNA表达水平无相关性（F=-0.054，P=0.682），与TRF2mRNA表达水平呈正相关（r=0.339，P=0.008），与POT1mRNA表达水平无相关性（r=0.052，P=0.695），与p53mRNA表达水平亦无相关性（r=0.037，P=0.778);胃黏膜病理积分与TRF1、TRF2、POT1蛋白表达量均呈正相关，与TRF1蛋白表达量回归方程为Y=1.974X+0.534（R2=0.437，F=45.04，P＜0.001），与TRF2蛋白表达量回归方程为Y=0.848X-1.457（R2=0.138，F=9.312，P=0.003），与POT1蛋白表达量回归方程为Y=1.743X+0.814(R2=0.294,F=24.15,P＜0.001)。
CAG发病的多因素Logistic回归分析:TRF1与POT1蛋白表达阳性为CAG的独立危险因素，TRF1蛋白表达阳性者发生CAG的风险是阴性者的16.54倍(95％CI:1.84-149.03)，POT1蛋白表达阳性者发生CAG的风险是阴性者的9.11倍(95％CI:1.64-50.54)。
(2)固本通络汤治疗CAG的机制研究
治疗前后病理资料比较:萎缩、肠化、慢性炎症治疗前后的构成比差异显著，具有统计学意义(P＜0.01);萎缩、肠化治疗前后积分及治疗前后总积分差异显著，具有统计学意义（P＜0.001）;慢性炎症治疗前后积分无明显差异(P＞0.05);异型增生病例数仅为1例，因而治疗前后差异无统计学意义。
研究结论:
我们通过对CAG患者胃黏膜端粒长度、TRF1、TRF2、POT1mRNA及蛋白表达与p53mRNA表达水平的病例.对照研究发现:
(1)CAG患者胃黏膜端粒长度较CNAG患者缩短，端粒的缩短与CAG的发生密切相关。
(2)CAG患者胃黏膜TRF1、TRF2、POT1蛋白表达量显著高于CNAG患者;CAG患者胃黏膜TRF2、POT1蛋白表达量与胃黏膜端粒长度呈负相关，考虑CAG患者胃黏膜端粒缩短与TRF2、POT1蛋白的过表达有关。
(3)CAG患者的p53mRNA表达水平与胃黏膜端粒长度存在轻度负相关，CAG患者中端粒长度缩短伴随着p53mRNA表达增高，初步考虑为p53通路的激活以介导细胞衰老，防止端粒过短被识别为DNA损伤，引起染色体不稳定而发生癌变，有待进一步研究证实。
(4)本研究60例受试者胃黏膜病理积分与胃黏膜相对端粒长度呈负相关，与TRF2mRNA表达水平及TRF1、TRF2及POT1蛋白表达量均呈正相关，且有统计学意义，因此胃黏膜端粒长度、TRF2mRNA表达水平、TRF1、TRF2、POT1蛋白表达量均可以预测胃黏膜的病变程度。
(5)TRF1和POT1蛋白表达阳性是CAG的独立危险因素，TRF1蛋白表达阳性者发生CAG的风险是阴性者的16.54倍，POT1蛋白表达阳性者发生CAG的风险是阴性者的9.11倍。临床上对胃黏膜TRF1及POT1蛋白的免疫组化检测可作为CAG诊断和预后的参考指标。
通过对固本通络汤治疗后胃黏膜病理改善者的自身前后对照研究发现:
(1)固本通络汤治疗前后胃黏膜相对端粒长度无明显差异，尚不能说明固本通络汤对胃黏膜端粒长度有影响。
(2)固本通络汤可以下调TRF1mRNA的表达水平。
(3)固本通络汤治疗前后TRF1、TRF2、POT1蛋白表达无明显差异，尚不能说明固本通络汤对TRF1、TRF2、POT1蛋白表达有影响。
(4)固本通络汤可以下调p53mRNA表达水平，初步考虑固本通络汤可能是通过延缓端粒缩短的速度，为DNA损伤修复机制提供机会，阻断p53介导细胞衰老通路的激活，从而达到延缓胃衰老、逆转CAG的作用，然其机制尚有待于进行细胞体外和动物体内实验做进一步的验证。