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目的:研究蒙药四味土木香散对机械牵张诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大模型的保护作用以及是否通过激活microRNA-34a-5p/Notch1通路对机械牵张诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大模型发挥保护作用。方法:1.四味土木香散含药血清的制备:40只Wistar大鼠分别灌胃等体积蒸馏水、0.972g/kg、1.944g/kg、3.888g/kg的四味土木香散水煎剂以及0.1g/kg阳性药卡托普利。每日1次,连续7d,末次给药后腹主动脉取血,离心备用。2.细胞随机分为Control组和MS组,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)分别检测各组细胞ANP、BNP mRNA和蛋白的表达水平以验证机械牵张诱导的细胞肥大模型的造模效果。3.细胞随机分为Control组、MS组、STP Low Dose组、STP Middle Dose组、STP High Dose组和Captopril组。不同剂量含药血清分别预干预培养10h和22h,20%水平牵张力牵张2h。乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测各组细胞上清液的LDH活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-6、TNF-α的含量变化,以筛选四味土木香散含药血清工作浓度与作用时间。4.细胞随机分为Control组、MS组、MS+STP组和STP组。检测各组细胞mi R-34a-5p的表达水平以及ANP、BNP mRNA和蛋白的表达水平。5.Target Scan 8.0数据库预测microRNA-34a-5p(mi R-34a-5p)的靶基因结果显示Notch1具有高可信度。Notch1 3’UTR野生型(WT)和突变型(MUT)质粒分别与mi R-34a-5p mimics和阴性对照(NC)共转染心肌细胞进行双荧光素酶报告基因分析检测,q RT-PCR和Western Blot验证Notch1 mRNA和蛋白的表达。6.细胞随机分为Control组、MS组、MS+STP组、MS+STP+NC组和MS+STP+mi R-34a-5p mimics组。Western Blot检测各组细胞ANP、BNP、Notch1、NICD1、Hes1的蛋白水平。7.细胞随机分为Control组、MS组、MS+STP组、MS+STP+si-NC组和MS+STP+si-Notch1组。Western Blot检测各组细胞ANP、BNP的蛋白水平。结果:1.MS组ANP、BNP的mRNA和蛋白表达水平较Control组显著升高(p<0.01),提示体外机械牵张诱导的细胞肥大模型造模成功。2.不同剂量含药血清干预细胞12h时LDH活性较MS组差异无统计学意义,STP Low Dose组干预24h时LDH活性较MS组显著降低(p<0.05);IL-6和TNF-α的含量随含药血清剂量的升高而降低(p<0.01),故选择低剂量四味土木香散含药血清干预模型细胞24h作为最佳工作浓度与作用时间。3.MS组mi R-34a-5p的表达较Control组显著上调(p<0.01);MS+STP组mi R-34a-5p的表达较MS组显著下调(p<0.01)。MS组ANP、BNP蛋白表达水平较Control组显著升高(p<0.01);MS+STP组ANP、BNP的蛋白表达水平较MS组显著降低(p<0.05)。4.Target Scan 8.0预测显示Notch1基因3’端非翻译区(3’UTR)与mi R-34a-5p有4个结合位点。Notch1 3’UTR-WT与mi R-34a-5p mimics共转染较其与NC共转染相比相对荧光素酶活性显著降低(p<0.01),Notch1 3’UTR-MUT与mi R-34a-5p mimics共转染较其与NC共转染相比相对荧光素酶活性差异无统计学意义;转染mi R-34a-5p mimics后Notch1 mRNA和蛋白表达显著下调(p<0.01)。5.与Control组相比,MS组Notch1、NICD1、Hes1的蛋白水平显著降低,ANP、BNP的蛋白表达水平显著升高(p<0.01);与MS组相比,MS+STP组Notch1、NICD1、Hes1的蛋白水平显著升高,ANP、BNP的蛋白表达水平显著降低(p<0.01);与MS+STP+NC组相比,MS+STP+mi R-34a-5p mimics组Notch1、NICD1、Hes1的蛋白水平显著降低,ANP、BNP的蛋白表达水平显著升高(p<0.05)。6.与MS+STP+si-NC组相比,MS+STP+si-Notch1组ANP、BNP的蛋白表达水平显著升高(p<0.01)。结论:1.蒙药四味土木香散对机械牵张诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大模型发挥保护作用。2.在H9c2心肌细胞中,Notch1是microRNA-34a-5p的靶基因。3.蒙药四味土木香散可能通过部分激活microRNA-34a-5p/Notch1通路缓解机械牵张诱导的H9c2心肌细胞肥大。