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近年来,水稻条纹叶枯病等病毒性农业病害在我国大范围发生,已成为我国分布最广、危害最大的一类农业病害。该病害来势猛、危害重、损失大,严重威胁水稻、玉米、小麦等主要农作物的经济收入,因此防治此类病害势在必行。这些病害是出水稻条纹叶枯病毒、水稻黑条矮缩病毒和玉米粗缩病毒等病毒所致。研究发现水稻条纹叶枯病病毒等不会通过作物间的机械接触而感染,只能借助介体昆虫吮吸作物汁液来达到病害传播的目的。灰飞虱(Laodelphax striatellus)是这些病毒的主要介体和传播者。可见,病毒性农业病害的表征是病,实质是虫,内在核心是病毒,外在关键是灰飞虱,因此要想控制水稻条纹叶枯病等病毒性病害必须有效控制灰飞虱,“治虫防治”是关键。
mariner类转座子属于DNA转座子中的Tc1/mariner超家族成员,广泛存在于细菌、昆虫、植物等各种生物体内。研究发现mariner类转座子结构简单,转化稳定、高效,且转座过程与宿主无关,其中转座过程的宿主无关性使其成为转基因载体研究的焦点,目前已利用mariner类转座子成功构建了多个转基因载体。若把这类载体应用于转基因昆虫生产,将为灰飞虱的防治开辟新的思路。本研究通过对山东省5个地区灰飞虱体内的mariner类转座子结构与组成的研究,分析它们与毛里塔尼亚果蝇mariner转座子的同源性,进而探讨其作为转基因载体的可能性,期望能为这类转座子在病虫害防治中的应用提供一些理论依据。主要内容如下:
1、根据mariner类转座子的转座酶保守序列设计简并引物,以山东省5个地区不同灰飞虱种群的基因组DNA为模板,通过PCR扩增分别扩增出了9个不同的mariner类转座子拷贝,初步证实在灰飞虱中存在mariner类转座子。通过片段回收、克隆和测序,获得其核苷酸序列,提交Genbank数据库,注册号为EU542020-EU542028。
2、利用相关软件对所获得的序列进行分析,发现序列长度集中于430bp、500bp和800bp左右,且各拷贝之间同源性差异较大,从34%到99%不等。这表明灰飞虱体内的mariner类转座子具有序列组成的高度多样性。
3、将测得的9个mariner类转座子拷贝与核酸数据库的mariner类转座子7个亚族中的19个常见序列进行系统学分析,显示L5QFclone493拷贝属于mauritiana亚族,而其他8个拷贝没有明显同源的亚族,可能属于新亚族,其具体情况尚待进一步研究。
4、进一步分析L5QFclone493序列,并对其作为转基因载体的可能性进行预测,以期为mariner类转座子在转基因中的应用以及病虫害的防治奠定基础。分析表明,这段序列与mosl的核苷酸同源性为64.15%,氨基酸序列同源性为55.32%。但该序列在核定位信号(NLS)和D,D(34)D等关键部位发生突变或缺失,推测可能没有转座活性。因此在转基因方法防治灰飞虱方案中,只能作为内源性的mariner类转座子因素加以考虑。