H₂S是继NO、CO之后发现的第三种具有氧化还原信号传导功能的气态小分子物质。虽然H₂S参与多种生理过程,但它的分子作用途径仍不明晰。H₂S的一种作用机制可能是通过对目标蛋白巯基/二硫键的硫烷化修饰生成氢过硫化物来实现作用的。本文以有多个半胱氨酸巯基位点的蒜酶为目标蛋白,L-乳酸脱氢酶（L-LDH）、D-乳酸脱氢酶（D-LDH）作为验证结果正确性的辅助蛋白,三种酶在催化底物同时会消耗荧光物NADH（荧光强度越低,反映酶活性越强）,从而监测H₂S与蛋白的相互作用,揭示出H₂S与三种酶蛋白的互作方式。实验结果如下:（1）研究以3种试剂（NaHS、Na₂S、K₂S_n）为H₂S供体,以分子荧光光谱法体外实时监测H₂S对三种酶的作用过程。在一定浓度范围内（0.125-0.5mmol/L）,Na₂S、NaHS、PS对三种酶活性均有抑制效果,并存在浓度依存关系。实验中巯基氧化剂（H₂O₂、GSSG）、巯基衍生剂（NEM）均能不同程度抑制酶活性,巯基保护剂（DTT）能够使酶活受抑制情况减弱,推测这三种酶中均可能含有可恢复的半胱氨酸活性位点。（2）通过SDS-PAGE凝胶电泳和圆二色谱（CD）研究了三种酶活性抑制与酶蛋白结构的关系。H₂S处理过的蒜酶和L-乳酸脱氢酶酶蛋白分子量改变不明显,排除了H₂S是通过形成蛋白分子间的二硫键或者三硫键的方式抑制酶活;借助紫外可见吸收光谱得出了Na₂S、NaHS、K₂S_n溶液中K₂S_n含有最多的硫烷硫（Sn）;利用CD表明三种酶control组的蛋白具有最高含量的α-螺旋结构及最低的β-折叠结构,随着硫烷硫（S_n）含量的增多,对应处理组中酶蛋白α-螺旋结构含量下降,β-折叠结构含量升高。再次揭示PS具有最强的半胱氨酸巯基作用力,导致蛋白二级结构的改变。（3）利用MALDI-TOF-MS/MS验证H₂S是否通过硫烷硫的方式对蒜酶和L-乳酸脱氢酶半胱氨酸巯基衍生形成分子内二硫键。MS/MS结果得出H₂S抑制蒜酶及L-乳酸脱氢酶酶活是通过对酶蛋白上部分半胱氨酸巯基活性位点硫烷化进行相互作用的。