拟南芥Rab1及Rab2家族基因的克隆和功能研究

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在真核生物中,细胞的生长、物质合成、分泌等重要生物过程都伴随着蛋白在各细胞器之间的运输,而囊泡是各细胞器间蛋白运输的主要载体。Rab蛋白,是一类分子量在20-25kDa之间的GTP酶,调控囊泡在细胞内各细胞器之间的运输。哺乳动物的Rab1和Rab2蛋白已被证明调控囊泡从内质网到高尔基体运输。植物的个别Rab1和Rab2蛋白也有研究认为与囊泡从内质网到高尔基体运输有关。然而,由于高等植物具有多个Rab1和Rab2基因,是否所有的Rab1和Rab2基因都参与这一生物过程还是未知数。酵母只有1个Rab1蛋白Ypt1,没有Rab2,因此,Ypt1是酵母唯一的调控囊泡从内质网到高尔基体运输的GTP酶。酵母温敏突变株ASY01是一个Ypt1基因功能部分缺失菌株,在26℃可以正常生长,但在37℃不能生长。拟南芥4个Rab1基因,分别是AtRabA1、AtRablB1、AtRablB2、AtRablC1,3个Rab2基因。我们克隆了所有4个Rab1基因和2个Rab2基因。序列同源性分析发现Rab1在从低等到高等的许多物种都有高度的保守性。将克隆的Rab1及Rab2家族基因构建载体转化Ypt1基因功能部分缺失的酵母温敏突变株ASY01。温度敏感性实验结果显示Rab1家族基因都能与ASY01进行功能互补,都具有调节囊泡从内质网到高尔基体运输的功能。而Rab2家族基因AtRab2A1、AtRab2A2均不能对Ypt1进行功能互补。
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