【摘 要】
：
研究背景和目的宫腔粘连（Intrauterine adhesions,IUA）是严重危害女性生殖健康的疾病之一,其病理基础是子宫内膜基底层损伤后修复障碍,子宫内膜上皮被纤维组织替代,最终发生纤维化导致粘连形成。胶原过度沉积是IUA纤维化发生的关键,但关于胶原合成的调控机制目前尚不明确。前期研究通过IUA患者子宫内膜组织进行全基因测序发现Foxf2、Smad6与COL5A2异常表达,且通过启动子分析
【基金项目】
：
2017年国家自然科学基金（No.81771525）；
论文部分内容阅读
研究背景和目的宫腔粘连（Intrauterine adhesions,IUA）是严重危害女性生殖健康的疾病之一,其病理基础是子宫内膜基底层损伤后修复障碍,子宫内膜上皮被纤维组织替代,最终发生纤维化导致粘连形成。胶原过度沉积是IUA纤维化发生的关键,但关于胶原合成的调控机制目前尚不明确。前期研究通过IUA患者子宫内膜组织进行全基因测序发现Foxf2、Smad6与COL5A2异常表达,且通过启动子分析发现COL5A2上游启动子区域可能存在Foxf2与Smad6的转录结合位点。Foxf2是叉头框转录因子家族的成员之一,在间质中特异表达,参与胶原的合成。而Smad6 是 TGF-β/骨成型蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）信号通路的关键负调控分子,可以抑制胶原的合成。本研究推测Foxf2与Smad6可能共调控COL5A2转录表达参与IUA的发病,目前尚无关于这方面的研究报道。本研究拟通过体内外实验验证Foxf2和Smad6参与纤维化,并通过免疫共沉淀（CoIP）、染色体免疫共沉淀（ChIP）、荧光素酶报告基因实验验证Foxf2与Smad6共调控COL5A2的转录表达,阐明其在IUA纤维化中的发病机制,为IUA的防治提供理论依据。方法与结果1.下调Foxf2或上调Smad6表达对TGF-β1诱导的人子宫内膜间质细胞株（THESCs）纤维化的影响方法:通过TGF-β1刺激THESCs构建子宫内膜细胞纤维化模型;分别于TGF-β1建模前和建模后转染si-Foxf2或pc-DNA3.1-Smad6验证下调foxf2或上调Smad6表达对TGF-β1诱导的细胞纤维化的影响。qRT-PCR及WB法检测纤维化标记物COL5A2、COL1A1、FN、a-SMA表达;EdU检测细胞增殖能力;流式检测细胞周期。结果:TGF-β1促进THESCs纤维化,纤维化标记物COLIA1、COL5A2、FN、a-SMA等表达明显增加;以及促进细胞增殖和细胞周期由G0/G1期进入S期;下调Foxf2或上调Smad6表达均可抑制TGF-β1诱导的纤维化改变,抑制细胞的增殖,阻滞细胞周期由G0/G1期向S期进入;其中同时下调Foxf2和上调Smad6表达效果更明显。2.Foxf2与Smad6共调控COL5A2的转录表达方法:通过细胞免疫荧光检测Foxf2与Smad6在细胞的定位以及与COL5A2的关系;CoIP检测Foxf2与Smad6的相互作用,ChiP、荧光素酶基因报告实验检测Foxf2和Smad6与COL5A2启动子区域的结合;最后通过LV-Foxf2和pcDNA-Smad6共转染THESCs,qRT-PCR检测COL5A2表达验证两者调控COL5A2转录表达的关系。结果:细胞免疫荧光结果显示Foxf2与Smad6聚集于核内,Foxf2正调控COL5A2表达,Smad6负调控COL5A2表达;CoIP结果显示Foxf2与Smad6蛋白间相互结合;ChiP和荧光素酶报告基因结果显示COL5A2上游启动子区域存在Foxf2和Smad6共同的转录结合位点;qRT-PCR结果是Smad6可抑制Foxf2诱导的COL5A2转录,但不能完全逆转。3.Foxf2与Smad6在大鼠IUA发病中的作用及其妊娠的影响方法:采用机械搔刮和感染双重损伤法构建大鼠IUA模型,在造模时子宫壁局部注射腺病毒ADV2-Foxf2-1810和ADV4-Smad6分别下调Foxf2和上调Smad6表达。通过HE染色检测内膜腺体数量,Masson染色检测内膜纤维化面积,免疫组化检测纤维化指标COL5A2、COL1A1、Foxf2、Smad6和整合素αvβ3表达,扫描电镜检测子宫内膜上皮细胞饮突表达,与雄鼠交配检测胚胎数量。结果:下调Foxf2或上调Smad6表达均可减轻双重损伤法导致的大鼠IUA,减轻纤维化,改善子宫内膜腺体表达,抑制COL5A2及COL1A1的表达;增加αvβ3和胞饮突的表达,改善子宫内膜容受性,提高妊娠胚胎数量。结论:Foxf2和Smad6均参与了 THESCs纤维化过程,两者相互结合,在COL5A2启动子区域具有相同的转录结合位点。在大鼠IUA发病过程中,Foxf2与Smad6可能通过共调控COL5A2的转录表达参与了 IUA的发病,下调Foxf2或上调Smad6表达均可抑制纤维化,提高子宫内膜容受性,改善妊娠结局。
其他文献
目的结直肠癌（colorectal cancer,CRC）为全球第三大恶性肿瘤,中晚期结直肠癌患者治疗效果不佳。因此深入研究结直肠癌发生发展的分子机制,有助于寻找其治疗靶点及改善患者预后。miRNA是小的单链非编码RNA,主要通过与3’非翻译区的互补序列结合而与mRNA相互作用,从而发挥基因负性调控的作用。miR-452-5p已被报道在多种肿瘤的发生发展中起重要作用,但其在结直肠癌中的研究较少。本
在金融科技飞速发展、金融创新日新月异的大背景下,银行要推动金融服务与产品的不断升级,除加大自主创新投入外,还需要加强与先进企业的交流合作,及时吸收借鉴外部创新成果。值得关注的是,一旦供应商（合作方）与第三方就相关外部创新成果的知识产权发生争议,银行可能会被动卷入其中,甚至面临来自第三方的侵权指控。本文试从一则银行因采购存在专利权争议的智能产品而被诉侵权的案例入手,分析此类知识产权纠纷的应对策略,并
研究背景:目前,人口老龄化在中国已是一个不得不面对的问题,老年人自身的机体功能减退,脑卒中的发病概率会逐渐增高;而由于生活习惯的不健康,比如吸烟、饮食不规律、肥胖、过量饮酒等原因,脑卒中在中年甚至青年人中的发病率也在上升。卒中发生后,往往会给患者带来各种肢体运动障碍。其中,上肢的运动障碍,会影响到患者如穿衣、刷牙、吃饭等精细活动,对患者的日常生活有更大的负面影响,也会增大家属的负担。随着脑卒中患者
研究背景高血压是我国最常见的、累及约3亿人群的重大慢性病。由于社会老龄化以及生活方式改变等原因,高血压发病率仍在不断增长,我国每年新增约1,000万高血压患者。高血压是心、脑、肾血管病变最主要的危险因素。高血压血管并发症,包括脑血管病变引起的脑卒中、心血管事件、以及微血管病变引起的肾脏和视网膜损害是高血压患者致死、致残的主要原因。与血压正常者相比,高血压患者脑卒中发生率增加3-4倍,心肌梗死、心力
研究背景和目的IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）是我国最常见的原发性肾小球疾病,20%～40%的IgAN病人在10～20年会逐渐进展至终末期肾脏病（ESRD）,最终需长期肾脏替代治疗。如何早期甄别高进展风险的IgAN病人,对其进行积极干预治疗,延缓其进展至ESRD,是目前临床医生亟待解决的关键问题。传统的临床指标如估算的肾小球滤过率（eGFR）、蛋白尿、高血压在预测IgAN进展
研究背景:脑卒中是一个全球性的健康问题,和缺血性心脏病、恶性肿瘤构成了大多数国家的三大致死疾病,具有高发病率、高致残率和高死亡率的特点。在脑卒中发生后,约70%～80%的幸存者残留有不同程度的残疾,接近一半患者甚至失去独立生活的自理能力,给其家庭甚至整个社会,都形成了沉重的经济压力。卒中幸存者中,约55%～75%遗留肢体运动障碍,上肢障碍占到其中的80%以上,并且其中只有约三成的患者能实现上肢运动
第一章研究背景良性前列腺增生（BPH）是老年男性的一种常见病。经尿道前列腺电切术（TURP）和开放性前列腺摘除术（OP）是手术治疗的“金标准”。随着相关技术的发展,临床上出现了多种新的手术方式,并应用于大体积BPH治疗上。其中经尿道前列腺解剖性剜除术（TUAEP）具有很大的应用前景。目前,针对许多大前列腺的研究将前列腺体积选择在60ml以上,对80ml甚至是100g以上的更大前列腺体积的腔内手术治
肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71）可引起手足口病、严重中枢神经系统损伤并发症如脑膜炎、脑干脑炎、急性弛缓性麻痹和神经源性肺水肿等,具有较高的病死率和致残率。因此,对EV71引发重症手足口病的发病机理进行研究,对控制手足口病的流行、预防及治疗具有十分重要的意义。最近,波形蛋白（Vimentin）确认为EV71的吸附受体。NF-κB信号通路在宿主抵抗病毒感染过程中起着关键作用。Vi
背景细胞疗法是目前全球医药卫生的第四大治疗支柱,其对于再生医学的发展起到至关重要的作用。再生医学的目的在于替代或再生细胞、组织以及器官以达到恢复或建立正常功能的作用。近20多年来,以细胞为基础的疗法已成功制造出多种产品用于临床治疗,然而仅局限于某些特定器官组织。毛囊作为人体内大量丰富存在的微型器官,其形态发生收到上皮成分和真皮成分的相互作用调控,进行有节律的周期变化,目前是再生医学中的热点研究领域