奥美拉唑(Omeprazol，OME)化学名称：5-甲氧基-2-[[(4-甲氧基-3，5-二甲基-2-吡啶)甲基]亚砜]-1H-苯并咪唑，是一个经典的质子泵抑制剂。它作用于胃壁上的泌酸细胞，广泛用于治疗多种酸相关性胃肠道病症及治疗幽门螺旋杆菌感染的疾病。奥美拉唑通过肝脏微粒体细胞色素P450氧化酶系统代谢，与CYP2C19酶特异性结合，代谢产物为5-羟基奥美拉唑和奥美拉唑磺酰化物。奥拉西坦(oxiracetam，ORC)是一种环γ-氨基丁酸类促智药，作用于谷氨酸盐促代谢受体，防止谷氨酸所致的神经毒性，还可促进磷酰胆碱和磷酰乙醇合成，提高大脑对葡萄糖和氧的利用及三磷酸腺苷/二磷酸腺苷的比值，使大脑中核酸和蛋白质的合成增加，研究显示，奥拉西坦能够很好的改善记忆和学习功能。奥美拉唑目前作为国内治疗反流性食管炎、消化性溃疡等与酸相关的胃肠道疾病的一线药物，已被广泛接受。其代谢途径已经明确，其药代动力学和生物等效性也有相应的研究。但有关奥拉西坦对奥美拉唑体内代谢的影响，国内外尚无任何研究资料。本实验拟建立大鼠及人血浆中奥美拉唑的HPLC测定方法，旨在研究大鼠及人口服奥美拉唑后体内药代动力学特征，从而进一步研究奥拉西坦对奥美拉唑在大鼠和人体内药动学的影响，从而为临床联合用药提供理论依据。本研究分为两个部分：　　第一部分：奥拉西坦对奥美拉唑在大鼠体内药代动力学的影响。　　目的：建立奥美拉唑在大鼠体内血药浓度的HPLC测定方法，并对两组分别给予安慰剂+奥美拉唑和奥拉西坦+奥美拉唑的大鼠进行奥美拉唑血药浓度的测定，考察两药合用后药代动力学的特征，从而确定奥拉西坦对奥美拉唑在大鼠体内药动学的影响。　　方法：⑴给药方法及血浆样品采集：雄性SD大鼠16只，随机分为两组，每组8只。实验组按200mg/kg给予奥拉西坦，每日2次灌胃，连续5天；对照组给予等量蒸馏水，每日2次灌胃，连续5天。第6日，给予奥美拉唑20mg/kg，于不同的时间点取血，-40℃保存。⑵血浆样品处理：取血浆200μl，加0.1mol/L NaOH溶液50μl，加内标(20μg/ml卡马西平的甲醇溶液)10μl，混匀后，加二氯甲烷2ml，涡旋震荡1min，3000rpm离心，弃上清液，取有机层，于40℃水浴氮气流吹干，100μl甲醇溶解进样。⑶色谱条件：Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5.0μm)，柱温25℃，流动相乙腈-水(50:50)，流速1.0ml/min，检测波长302nm，进样量20μl。⑷最低定量限及最低检测限的确定：用倍比稀释法确定最低定量限及最低检测限。⑸标准曲线的制备：配制0.01，0.025，0.05，0.1，0.25，0.5，1.0μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品，按血浆样品处理方法处理后进样。以奥美拉唑与内标的峰面积比值(Y)对血浆药物浓度(X)回归标准曲线方程。⑹回收率：分别制备浓度为0.025，0.1，0.5μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品各5份，按血浆样品处理方法处理后进样，奥美拉唑峰面积与等量奥美拉唑对照品溶液直接进样的峰面积比值，即得奥美拉唑的提取回收率；内标峰面积与等量内标溶液直接进样的峰面积比值，即得内标提取回收率；根据标准曲线方程计算的测得浓度与理论浓度的比值，即得方法回收率。⑺精密度：分别制备浓度为0.025，0.1，0.5μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品各5份，分别于一日内0，1，2，3，4h处理并测定，计算日内精密度；于0，1，2，3，4日处理并测定，计算日间精密度。⑻稳定性：0.1μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品处理后，分别于0，1，2，3，4h测定，考察处理样品稳定性；0.1μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品即刻处理并测定或-40℃低温避光保存7天后处理并测定，考察低温保存稳定性；0.1μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品即刻处理或反复冻融3次后处理，分别测定，考察反复冻融稳定性。⑼药代动力学分析：大鼠血浆样品按血浆样品处理方法处理并测定，根据标准曲线方程计算血浆药物浓度，用DAS2.1.1药代动力学软件对大鼠药-时数据进行处理，求算药代动力学参数。对两组参数进行统计学分析，看有无显著性差异。　　结果：①奥美拉唑保留时间为4.6min，卡马西平保留时间为5.7min，血浆内源性物质不干扰奥美拉唑和卡马西平的测定。②标准曲线方程：Y=1.3295X+0.0043，相关系数r=0.9993，奥美拉唑血浆药物浓度在0.01～1.0μg/ml范围内线性关系良好，最低定量限为0.005μg/ml，最低检测限为0.001μg/ml。③回收率：低、中、高三种不同浓度的奥美拉唑血浆样品的提取回收率分别(85.31±4.49)％，(83.27±2.73)％和(90.71±7.43)％，RSD值分别为5.26％，3.28％和8.19％；内标提取回收率为(91.64±5.60)％，RSD值为6.11％；方法回收率分别为(90.65±4.25)％，(100.31±8.64)％和(100.23±5.33)％，RSD值分别为4.69％，8.61％和5.31％。④精密度：日内精密度结果显示，低、中、高三种浓度血浆样品的RSD值分别为4.19％，4.97％和3.81％；日间精密度的RSD值分别为4.14％，3.51％和4.06％。⑤稳定性：血浆样品低温保存7天或反复冻融3次性质稳定，RSD值分别为4.62％和7.84％；处理血浆样品放置4h对测定无影响，RSD值为4.71％。⑥药代动力学特征：对照组和实验组大鼠按既定方案给药后，药代动力学参数如下：T1/2分别为47.09±18.65min，27.31±12.64min；AUC(0-t)分别为26.23±15.41 mg·min/L，41.47±22.85mg·min/L；AUC(0-∞)分别为27.58±15.44mg·min/L，42.23±22.41mg·min/L；CL/F分别为0.997±0.650L/min/kg，0.628±0.377L/min/kg：Cmax分别为0.477±0.213mg/L，0.804±0.531mg/L；Tmax分别为45.0±0.0min，46.88±5.30min；V/F分别为77.24±69.65L/kg，30.09±30.344L/kg。　　结论：⑴建立了大鼠血浆中奥美拉唑浓度的HPLC测定方法，该方法能使奥美拉唑和内标有良好的分离，血浆中内源性杂质对测定结果没有影响；血浆样品低温保存7天或反复冻融3次性质稳定，处理血浆样品放置4h对测定无影响；该测定方法简单、准确、重现性好，适用于大鼠血浆中奥美拉唑的含量测定。⑵大鼠在给予安慰剂或奥拉西坦达到稳态后再给予奥美拉唑，两组的药代动力学参数AUC(0-t)、AUC(0-∞)、CL/F、Cmax、Tmax、V/F，P值均大于0.05，T1/2的P值小于0.05。因此，本实验结论为在大鼠体内奥拉西坦影响奥美拉唑的代谢，使奥美拉唑的半衰期缩短。　　第二部分：奥拉西坦对奥美拉唑在健康志愿者体内药代动力学的影响。　　目的：建立奥美拉唑在健康志愿者体内血药浓度的HPLC测定方法，并对两组分别给予安慰剂+奥美拉唑和奥拉西坦+奥美拉唑的健康志愿者进行奥美拉唑血药浓度的测定，考察两药合用后药代动力学的特征。　　方法：⑴给药方法及血浆样品采集：8名男性健康受试者随机分为2组，每组4人。试验组口服奥拉西坦胶囊，每次0.8g，每日2次，连续服用6天：对照组每天口服空胶囊，每日2次，连续服用6天。第7日，给予奥美拉唑40mg，于不同的时间点取血，-40℃保存。⑵血浆样品处理：取血浆500μl，加磷酸盐缓冲液(PH=7.83)100μl，加内标溶液(卡马西平的甲醇溶液，4μg/m1)50μl，混匀后，加二氯甲烷5ml，涡旋震荡1min，3000rpm离心，弃上清液，取有机层，40℃水浴氮气流吹干，100μl甲醇溶解进样。⑶色谱条件：Diamonsil(R)C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5.0μm)，柱温25℃，流动相乙腈-水(45:55)，流速1.0ml/min，检测波长302nm，进样量20μl。⑷最低定量限及最低检测限的确定：用倍比稀释法确定最低定量限及最低检测限。⑸标准曲线的制备：配制0.01，0.05，0.1，0.25，0.5，1.0，2.0，3.0μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品，按血浆样品处理方法处理后进样。以奥美拉唑与内标的峰面积比值(Y)对血浆药物浓度(X)回归标准曲线方程。⑹回收率：分别制备浓度为0.05，0.25，2.0μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品，按血浆样品处理方法处理后进样，奥美拉唑峰面积与等量奥美拉唑对照品溶液直接进样的峰面积比值，即得奥美拉唑的提取回收率；内标峰面积与等量内标甲醇溶液直接进样的峰面积比值，即得内标提取回收率；根据标准曲线方程计算的测得浓度与理论浓度的比值，即得方法回收率。⑺精密度：分别制备浓度为0.05，0.25，2.0μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品，分别于一日内0，1，2，3，4h处理并测定，计算日内精密度；于0，1，2，3，4日处理并测定，计算日间精密度。⑻稳定性：0.25μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品处理后，分别于0，1，2，3，4h测定，考察处理样品稳定性；0.25μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品即刻处理并测定或-40℃低温避光保存4天后处理并测定，考察低温保存稳定性；0.25μg/ml的奥美拉唑模拟血浆样品即刻处理或反复冻融3次后处理，分别测定，考察反复冻融稳定性。⑼药代动力学分析：健康志愿者血浆样品按血浆样品处理方法处理并测定，根据标准曲线方程计算血浆药物浓度，用DAS2.1.1药代动力学软件对药-时数据进行处理，求算药代动力学参数。对两组参数进行统计学分析，看有无显著性差异。　　结果：①奥美拉唑保留时间为5.9min，卡马西平保留时间为7.6min，血浆内源性物质不干扰奥美拉唑和卡马西平的测定。②标准曲线方程：Y=3.2214X-0.0148，相关系数r=0.9999，奥美拉唑血浆药物浓度在0.01～3.0μg/ml范围内线性关系良好，最低定量限为0.005μg/ml，最低检测限0.001μg/ml。③回收率：低、中、高三种不同浓度的奥美拉唑血浆样品的提取回收率分别(78.63±3.84)％，(82.61±1.88)％和(74.54±1.93)％，RSD值分别为4.89％，2.27％和2.59％：内标提取回收率为(86.53±4.29)％，RSD值为4.95％；方法回收率分别为(98.97±2.07)％，(99.48±2.14)％和(92.67±1.10)％，RSD值分别为2.09％，2.15％和1.19％。④精密度：日内精密度结果显示，低、中、高三种浓度血浆样品的RSD值分别为2.79％，5.37％和1.00％；日间精密度的RSD值分别为4.14％，3.95％和2.47％。⑤稳定性：血浆样品低温保存4天或反复冻融3次性质稳定，RSD值分别为2.10％和2.59％；处理血浆样品放置4h对测定无影响，RSD值为3.87％。⑥药代动力学特征：8位健康志愿者按既定方案给药后，药代动力学参数如下：T1/2分别为1.496±0.834h，1.656±0.694h；AUC(0-t)分别为3.317±3.077mg·h/L，3.687±3.150mg·h/L；AUC(0-∞)分别为3.327±3.228mg·h/L，3.787±3.291mg·h/L；CL/F分别为11.819±7.756 L/h/kg，8.277±4.236L/h/kg：Cmax分别为1.136±0.774 mg/L，1.324±0.598mg/L；Tmax分别2.313±1.100h，2.0±0.845h；V/F分别为19.53±10.62L/kg，17.70±10.19L/kg。　　结论：⑴建立了健康志愿者血浆中奥美拉唑浓度的HPLC测定方法，该方法能使奥美拉唑和内标分离良好，缩短了保留时间和检测时间，血浆中内源性杂质不干扰测定结果；测定方法准确性、重现性均良好，且简单快捷；血浆样品低温保存4天或反复冻融3次对测定结果无影响，处理血浆样品放置4h性质稳定。⑵健康志愿者在给予奥拉西坦达到稳态后再给予奥美拉唑，两组的药代动力学参数T1/2、AUC(0-t)、AUC(0-∞)、CL/F、Cmax、Tmax、V/F，P值均大于0.05，两组间无显著性差异。在健康志愿者体内，奥拉西坦不影响奥美拉唑的代谢。