精液的稀释和保存是人工授精技术的关键环节,而猪人工授精时广泛采用的常温保存猪精液在保存过程中会受到各种因素的影响。随着保存时间的延长,精液质量会不断下降,其中一个重要因素就是精液中活性氧(ROS)的过量积累对精子造成的损害。精液中适量的ROS对精子有一定的生理促进作用,而过量的ROS则会导致精子产生病理损伤,影响精子的正常功能。因此,在猪精液常温保存稀释液中外源补充抗氧化剂成为提高精液抗氧化能力的一个重要手段,从而有效降低由过量ROS引起的精子氧化应激的产生。丹参素和迷迭香酸均为天然酚酸类化合物,具有良好的抗氧化活性。本研究在中效型自配稀释液中分别添加不同浓度的丹参素和迷迭香酸对猪精液进行稀释,并在17℃保存的不同时间测定精子活率、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量、ATP含量和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)活性等指标,探究两种抗氧化剂对猪精液常温保存效果的影响,筛选出最适添加浓度。并通过两种抗氧化剂的联合添加,筛选出两者的最佳配伍浓度,优化稀释粉配方。本研究获得以下主要结果:1.在猪精液常温保存稀释液中添加不同浓度(1、5、10、25、50、100μmol/L)的丹参素能够不同程度地改善精液保存质量。其中,添加25 mol/L丹参素效果最好,显著提高了精子活率、质膜和顶体完整率、ATP含量、线粒体膜电位和GAPDH活性(P<0.05)。精子活率、质膜和顶体完整率在保存第9 d分别为61.83%、57.80%和71.95%,精液有效保存时间达到9 d。添加25~100μmol/L丹参素能够有效提高精液T-AOC水平和SOD活性,并明显降低MDA含量(P<0.05)。此外,添加25μmol/L丹参素能显著提高精液保存第7 d的CAT活性(P<0.05)。2.将不同浓度(20、40、60、80、100、120μmol/L)的迷迭香酸添加到猪精液常温保存稀释液中,可以不同程度地改善精液保存质量。其中,添加40μmol/L迷迭香酸效果最好,显著提高了精子活率、质膜和顶体完整率、T-AOC水平、SOD活性、ATP含量、线粒体膜电位和GAPDH活性,并显著降低了MDA含量(P<0.05)。精子活率、质膜和顶体完整率在保存第9 d分别为66.47%、63.31%和73.77%,精液有效保存时间达到9 d。而稀释液中添加不同浓度的迷迭香酸对CAT活性无显著影响(P>0.05)。3.在不同浓度丹参素和迷迭香酸的配伍试验中,C4联合组的精子活率、质膜和顶体完整率均显著高于两者单独添加(P<0.05),并且C4和C5联合组的琥珀酸脱氢酶(SDH)活性在保存第7 d达到65.00 U/mL,显著高于两者单独添加(P<0.05)。此外,C4联合组与两者单独添加相比能在一定程度降低精液ROS水平,而C8联合组的ROS水平与对照组相比有升高的趋势,在一定程度上促进了ROS的产生。因此,丹参素和迷迭香酸的最佳配伍浓度为C4联合,即25μmol/L丹参素和40μmol/L迷迭香酸。综上,一定浓度的丹参素和迷迭香酸能够有效改善猪精液常温保存质量,延长保存时间。在稀释液中单独添加时,丹参素和迷迭香酸的最佳浓度分别为25μmol/L和40μmol/L,精液有效保存时间延长至9 d,精子活率分别达到61.83%和66.47%。两者联合添加时,25μmol/L丹参素和40μmol/L迷迭香酸配伍能够发挥优于两者单独添加的作用效果,使保存第9 d的精子活率提高到68.59%,精液保存质量得到进一步提升。