【摘 要】
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脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）是一种常见的神经系统疾病,造成持续的运动和神经功能障碍。随着交通事故和体育运动损伤增加,脊髓损伤发病率呈逐年上升的趋势。因缺乏有效的治疗,大多数患者仍遗留有各种功能障碍,严重影响患者生活质量,给社会造成巨大负担。目前对脊髓损伤的研究主要集中在继发性损伤,而氧化应激损伤是继发性损伤的重要组成部分。脊髓损伤后刺激神经细胞产生大量活性氧（React
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脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）是一种常见的神经系统疾病,造成持续的运动和神经功能障碍。随着交通事故和体育运动损伤增加,脊髓损伤发病率呈逐年上升的趋势。因缺乏有效的治疗,大多数患者仍遗留有各种功能障碍,严重影响患者生活质量,给社会造成巨大负担。目前对脊髓损伤的研究主要集中在继发性损伤,而氧化应激损伤是继发性损伤的重要组成部分。脊髓损伤后刺激神经细胞产生大量活性氧（Reactive Oxygen Species,ROS）,诱导细胞凋亡与自噬,从而导致神经细胞死亡。查尔酮类似物33是??一种具有双重抗氧化特性的抗氧化剂,其对脊髓损伤的治疗作用尚未见报道。在本研究中,我们评估了查尔酮类似物33在脊髓损伤中的作用,并研究了其潜在机制。通过实验,我们证明查尔酮类似物33可显着改善脊髓损伤后小鼠的功能恢复过程与结果,并能够在体内和体外抑制神经元的凋亡和自噬。我们使用脊髓损伤的小鼠模型评估了查尔酮类似物33对小鼠损伤后运动功能影响,实验结果表明查尔酮类似物33组小鼠后肢运动功能评分显著升高（P＜0.01）,脊髓组织显著改善。在体外实验中,首先采用CCK-8法检测细胞存活率,结果显示查尔酮类似物33组的细胞存活率显著高于双氧水组（P＜0.05）,表明其能保护VSC4.1细胞免受细胞毒性损伤。接着采用TUNEL法、免疫印迹法和流式细胞术分析细胞凋亡,流式细胞术和TUNEL染色结果显示,查尔酮类似物33治疗后凋亡细胞以及凋亡小体显著减少（P＜0.01）;免疫印迹实验结果显示查尔酮类似物33处理后Bax/Bcl-2比值显著降低（P＜0.01）,证明查尔酮类似物33能抑制细胞凋亡。通过MDC和免疫印迹实验检测自噬,MDC染色结果提示药物治疗后自噬小体减少;免疫印迹结果显示自噬相关蛋白LC3B表达增加（P＜0.05）,p62降低（P＜0.05）,证明查尔酮类似物33能抑制自噬。此外流式细胞术显示查尔酮类似物33能抑制细胞内ROS的产生,免疫印迹实验显示查尔酮类似物33组中HO-1以及核内Nrf2显著上调（P＜0.05）,证明查尔酮类似物33促进Nrf2入核,激活下游抗氧化蛋白HO-1表达。在小鼠脊髓损伤模型中,免疫组织化学染色也观察到了类似的结果。有趣的是,ML385（一种Nrf2抑制剂）能部分抑制了查尔酮类似物33的抗凋亡和自噬抑制作用。综上所述,查尔酮类似物33可能通过激活Nrf2/HO-1通路以及ROS抑制而具有抗细胞凋亡和抗自噬作用,这有助于脊髓损伤的康复。此外,我们的研究结果推测查尔酮类似物33在未来可能成为脊髓损伤的一种潜在药物。
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