前言：　　 高压氧作为一种治疗手段,广泛应用于临床。研究显示高压氧促进伤口部位的纤维母细胞、上皮细胞和血管的增生,促进伤口愈合,增强细胞的杀菌能力,对特殊厌氧菌具有致命的杀伤力。在全身炎症反应综合征(Systemic inflammatoryresponse syndrome,SIRS)状态下,高压氧的免疫调节作用,包括对T细胞的影响以及抗炎作用的研究尚不多见。SIRS从一个新的角度阐明多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的重要病理生理及发生发展过程。经过20余年的大量实验研究和临床资料揭示,创伤、感染、休克发展到MODS存在着一条共同通路,即SIRS。本实验以SIRS为基础,以免疫功能和炎症反应中具有代表性的脾T淋巴细胞为研究对象,研究高压氧对正常机体以及SIRS时细胞免疫功能的影响,并探讨其作用机制。　　 方法：　　 一、实验动物与分组　　 健康雄性SD大鼠50只,购自中国医科大学实验动物中心,体重约140～180g,随机分为5组,每组10只。A组:腹腔注射等量生理盐水(5ml/kg);B组:腹腔注射等量生理盐水(5ml/kg),做3次高压氧;C组:腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液(500mg/kg);D组:腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液(500mg/kg),做1次高压氧;E组:腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液(500mg/kg),做3次高压氧。　　 二、大鼠SIRS模型建立　　 将酵母多糖粉剂和无菌液体石蜡混合,高频振荡15分钟,100℃水浴80分钟灭菌,制成浓度为100 mg/ml的酵母多糖A-石蜡混悬液,存放于4℃备用,临用前40℃水浴复温,高频振荡15分钟后注药。大鼠实验前18小时开始禁食,不禁水。C、D、E组以500mg/kg体重给大鼠腹腔注射酵母多糖-石蜡悬液,A、B组注射等量生理盐水(5ml/kg)。　　 三、高压氧治疗方案　　 做1次高压氧的时间为腹腔注射后4小时,做3次高压氧的时间分别为腹腔注射后4小时,10小时,18小时。每次高压氧都遵循以下方案:100％纯氧洗舱5分钟,以清除舱内原有空气。匀速加压至2ATA(约10-15分钟),用已校对的测氧仪测舱内氧浓度达95％以上,期间以4L/min的速度持续通O2避免CO2蓄积,并将压力维持在2ATA。1小时后以同样速度匀速减至常压,出舱。　　 四、标本采集及检测　　 腹腔注射24小时后,每只鼠按实验设定顺序取脾,标号,脾脏剪至糊状,100目筛滤过(加PBS),离心1000rpm10分钟,弃上清,低渗休克法溶解红细胞,RPMI1640调整细胞浓度1×106/ml。(1)取上述液体0.1ml。(2)4℃离心10分钟,弃上清。(3)加入冷PBS1ml,轻轻震荡,1000rpm4℃离心10分钟,弃上清,重复2次。(4)加200 uL Buffer。(5)加10 uL AnnexinV-FITC。(6)加PI10uL,25℃,15分钟。(7),加300uLBuffer30分钟内上流式细胞仪测量。　　 五、统计学方法　　 用SPSS13.0 for Windows软件分析数据。各组数值用均数士标准差表示,用F检验做方差齐性检验,当方差齐性相等时,两组间采用两独立样本t检验,方差齐性不等时采用近似t检验即t检验。设P＜0.05为有显著性差异。　　 结果：　　 一、大鼠SIRS模型建立效果　　 一般情况:腹腔注射酵母多糖-石蜡溶液组大鼠呼吸急促,伴有明显喘鸣,皮肤粘膜发绀,出汗,毛色灰暗,部分大鼠有鼻出血,腹胀,腹泻。大鼠进食明显减少,活动差,对外界刺激无反抗。大体改变:杀鼠后,见SIRS组大鼠腹腔渗出增多,肠管扩张,程度不一;肝脏呈暗红色或暗紫色;肺脏可见不同程度肿胀,部分可见充血出血点;心脏,肾脏,脾脏,胰腺无明显大体改变。　　 二、高压氧对正常大鼠脾T细胞的影响　　 B组CD4+T细胞比例同对照组(A组)相比明显减少(P＜0.01),CD8+T细胞基本无变化,CD3+CD4+/CD3+ CD8+比值明显下降(P＜0.05)。　　 三、酵母多糖对脾T细胞的影响　　 注射酵母多糖的大鼠CD4+和CD8+T细胞均较对照组明显减少(P＜0.01),减少程度基本平行,所以CD3+CD4十/CD3+CD8+无变化。　　 四、高压氧对SIRS大鼠脾T细胞的影响　　 高压氧使酵母多糖导致的CD4+T细胞减少明显恢复(P＜0.05)。同高压氧对正常大鼠T细胞的影响一样,高压氧几乎不影响CD8+T细胞,故CD3+ CD4+/CD3+CD8+比值升高(P＜0.05)。　　 五、一次高压氧和三次高压氧对脾T细胞的不同影响　　 D组和E组的CD4+和CD8+T细胞比例无统计学差异。也就是说,三次高压氧治疗对于CD4+T细胞的恢复并不比一次高压氧治疗具有更好的效果。　　 结论：　　 高压氧特异性影响CD4+T细胞,对CD8+T细胞几乎无影响。它可以使正常机体CD4+T细胞明显减少,对SIRS时减少的CD4+T细胞却有明显的上调作用。高压氧对正常机体和没有高炎症反应的轻微SIRS产生致炎作用。但是,三次高压氧在机体不同状态下对炎症的促进或抑制可能有更明显的作用。