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目的：
检测雌激素受体(estrogen receptor,ER),孕激素受体(Progesterone receptor,PR),在乳腺癌,癌旁及远端正常组织中的表达,以解释可能存在的内分泌治疗抵抗的原因,以及同一患者三个部位阳性表达的不同所引起的生物学行为的差异。
方法：
临床病理资料:收集中国医科大学附属第一医院2010年3月-2010年7月手术切除乳腺癌标本55例,入组标准为所有病人均为女性患者,患者术前均未行任何放、化疗及内分泌治疗。每例患者分别取癌组织,癌旁2cm处组织及癌旁5cm以外组织(病理均确认为正常乳腺组织)。
免疫组化染色及判定方法:采用PV9000免疫组化二步法检测乳腺癌,癌旁及癌旁远端正常组织中ER,PR的表达。兔抗人雌激素受体ER单克隆抗体(工作浓度为1:75),兔抗人孕激素PR单克隆抗体(工作浓度为1:75)均购自福州迈新生物公司。PV9000免疫组化检测试剂盒和氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自北京中杉生物有限公司。所有蜡块切片后,经60℃烘干、脱蜡、水化,双氧水封闭内源性过氧化酶,高温高压处理,柠檬酸修复液(pH6.0)高温高压修复抗原,冷却后,加入过氧化物酶阻断剂A10min,加入一抗4℃过夜,二抗C37摄氏度30min,加入D试剂37摄氏度30min,最后DAB显色,苏木精复染,脱水封固,光镜下观察,PBS替代一抗做阴性对照。结果判定方法:ER,PR蛋白反应阳性为棕黄色颗粒定位于细胞核。每个病例由两位观察者采用盲法随机选择5个高倍视野,计数200个细胞,染色强度(A)以阳性细胞呈色反应为准:无特异性着色为0分,浅棕色为1分,棕黄色为2分,深棕色为3分;染色的阳性细胞所占比例(B)按下列标准评定记分:阴性细胞或弱阳性细胞＜5％为0分,阳性细胞占5～25％为1分,阳性细胞占26％～50％为2分,阳性细胞51％～75％为3分,阳性细胞＞75％为4分。两种评分相乘(AxB),将结果分为:0分为阴性(-);1～4分为弱阳性(+);5～8分为中度阳性(++);9～12分为强阳性(+++)。
结果：
临床上将ER,PR统称为激素受体(hormone receptor,HR),本研究中同一患者癌组织,癌旁组织及远端正常组织HR均阳性的患者例数最多,为17个,占30.9％,癌和癌旁阳性,远端正常阴性的的患者为12个,占21.8％;正常到癌组织的由阴转阳患者总数是一直都是阴性的两倍(10:5);另外由正常到癌时的由阳转阴的患者也有9个,占16.4％
因为患者例数较少,所以我们进一步将癌旁组织及癌旁远端正常组织作为一个整体统称正常组织,认为它们其中只要有一个阳性即为正常组织阳性。分析发现ER癌组织阳性患者中其正常组织也同时阳性(28/43,65％)的患者所占比例与ER阴性患者而其正常组织阳性(7/12,58％)的患者所占比例无统计学差异,P＜0.05;相似地,PR癌组织阳性患者中其正常组织也同时阳性(30/42,71％)的患者所占比例与PR阴性患者而其正常组织阳性(9/13,69％)的患者所占比例无统计学差异,P＜0.05;HR同PR。
最后,我们根据同一个患者中ER或PR或HR在癌组织和正常组织中的表达情况将所有患者分为四组:①癌及正常组织均阳性表达;②癌表达阳性,正常阴性;③癌表达阴性,正常组织阳性;④癌及正常组织均表达阴性。结果发现ER:四组患者年龄上无差异,P＜0.05;③、④组在组织学分级,TNM分期、Her-2阳性表达,淋巴结转移上均高于①组,P＜0.05;④组在Her-2阳性表达上高于②组,P＜0.05;。PR:四组患者年龄上无差异,P＜0.05;③、④组在TNM分期、Her-2表达,淋巴结转移上均高于①组,P＜0.05;③组在组织学分级上高于①组,P＜0.05。
但是临床上最重要的是患者激素受体HR,因为我们认为患者不论癌组织或正常组织,只要ER或PR阳性都看作HR阳性。结果发现:③,④组在Her-2阳性表达,TNM分期,淋巴结转移上显著高于①组,P＜0.05:另外④组在年龄上显著低于①组,P＜0.05,在组织学分级上高于①组;④组在TNM分期上显著高于②组,P＜0.05。
结论：
同一患者癌组织,癌旁组织及远端正常组织HR均阳性的患者例数最多,为17个,占30.9％,癌和癌旁阳性,远端正常阴性的的患者为12个,占21.8％,提示患者如果在癌和癌旁都是阳性,那么它在远端正常组织中阳性的可能性也比较大,同时提示受激素作用的患者更容易发生癌变;正常到癌组织的由阴转阳患者总数是一直都是阴性的两倍(10:5),提示在癌变是较易受激素的影响。另外由正常到癌时的由阳转阴的患者也有9个,占16.4％,提示在癌激素受体是阴性的患者,可能是有阳性转变而来的。
由于样本例数较少,我们将癌旁组织及癌旁远端正常组织作为一个整体统称正常组织后,发现ER或PR或HR癌组织阳性患者中其正常组织也同时阳性的患者所占比例与其对应的阴性患者而其正常组织阳性的患者所占比例无统计学差异,提示在由正常组织转变为癌的过程中,其受体变化时不确定的。也就是说同一患者中其癌组织的受体表达情况并不能反映其正常组织的受体状态。
ER癌组织阳性患者中其正常组织也同时阳性的患者所占比例与ER阴性患者而其正常组织阳性的患者所占比例无统计学差异,提示ER癌组织阳性患者其正常组织也同时阳性的可能性并不高于ER癌组织阴性患者;同理,PR也是:也就是说同一患者中其癌组织的受体表达情况并不能反映其正常组织的受体状态。
进一步的分组分析提示ER或PR或HR同时阳性表达组其生物学行为可能优于ER或PR或HR其癌组织阴性组,不论其正常组织阳性或阴性;ER或PR或HR癌组织阳性,正常组织阴性组其生物学行为可能与ER癌组织阴性,正常组织阳性组无显著差异;HR癌组织阳性,正常组织阴性组其在病理分期上可能优于HR癌组织和正常组织均阴性组,但还需进一步随访研究证实。