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目的:原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,在各种恶性肿瘤的死亡顺序中居第二位,每年死亡20多万人,约占世界肝癌死亡人数的一半以上。虽然我国肿瘤的治疗水平有了很大的发展,但治疗方式主要靠手术、化学治疗、放射治疗和生物治疗等,而肿瘤热疗（Hyperthermia）是继上述方法后出现的第5种肿瘤治疗方法。随着对高温作用的深入研究以及热疗技术的提高,热疗作为放疗、化疗的辅助治疗方法,已在肿瘤的综合治疗中发挥了积极的作用,但理论研究的滞后严重影响了肿瘤热疗的临床实践的深入。不同类型的肿瘤细胞对加热的敏感性及其可能的分子生物学机制是值得研究和探讨的问题之一。恶性肿瘤发生、发展的过程,是细胞过度增殖和细胞凋亡受到抑制的过程。诱导细胞凋亡已成为治疗肿瘤的一个新热点。本研究以人肝癌Hep-G2细胞为研究对象,研究加热对人肝癌Hep-G2细胞凋亡及可能的分子生物学机制,为制定热疗的临床治疗方案提供更多的理论依据和参考。方法:1细胞选用人肝癌Hep-G2细胞,加热温度是43℃,加热时间为0小时（0 h）、0.5小时（0.5 h）、1小时（1 h）、1.5小时（1.5 h）,加热容器为水浴箱。2实验分组:采用随机对照原则分对照组和实验组,对照组即加热0 h组（正常培养的HepG2细胞）,实验组即热疗组（按热疗时间分3组:加热0.5 h、加热1 h、加热1.5 h）。3对照组和热疗组加热后同时继续培养48 h、72 h、96 h、120 h、144 h,用光镜进行计数绘制生长曲线。4对照组和热疗组加热后同时继续培养0 h、3 h、6 h、12 h、24 h,通过流式细胞仪（FCM）用AnnexinV-EGFP检测凋亡细胞百分率。在做FCM之前,用倒置显微镜观察温热后细胞的生长状况及形态学改变并照相。5对照组和热疗组加热后同时继续培养0 h、3 h、6 h、12 h、24 h,用S-P免疫组织化学染色法观察人肝癌细胞株中Bax、Bcl-2及p53蛋白的表达情况。6收集对照组细胞和加热1.5 h继续培养6 h后的细胞,透射电镜下观察细胞超微结构变化。7实验数据采用SPSS11.5统计软件处理。均采用析因设计方差分析进行统计,与对照组比较,P＜0.05有统计学意义。结果:1热疗对细胞生长曲线的影响43℃水浴加热0.5 h、1 h、1.5 h后在不同培养时间的平均细胞数减少,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。说明加热对细胞能产生一定的抑制效应,随着加热时间的延长,以加热1.5 h组存活细胞的数量减少最明显。2热疗对凋亡细胞百分率的影响经43℃水浴加热不同时间后不同培养时间的Hep-G2细胞流式细胞仪检测显示,随着加热时间的延长,凋亡细胞百分率有增加的趋势,在相同培养时间时,加热1 h组和加热1.5 h组分别与对照组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。对照组在不同培养时间凋亡细胞百分率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,热疗组随着培养时间的延长,凋亡细胞百分率有增加的趋势,在继续培养6 h后达到高峰,后又逐渐减少,在相同加热时间时,培养6 h组与其他各培养组比较,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。凋亡细胞百分率在加热1.5 h培养6 h后达到最大值32.83%,凋亡细胞百分率在加热时间和培养时间之间存在交互作用(Fheating*culture=5.20,P=0.00)。3热疗对3种蛋白表达的影响免疫组化结果显示,热疗组Bax和p53蛋白的表达有所增加,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）,对照组在不同培养时间蛋白表达率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,热疗组随着培养时间的延长,Bax和p53蛋白的表达率有增加的趋势,在继续培养6 h后达到高峰,后又逐渐减少,Bax和p53蛋白的表达在加热时间和与培养时间之间存在交互作用(Fheating*culture=12.55,P=0.00;Fheating*culture=3.642,P=0.00)。加热1.5 h培养6 h后,Bax和p53蛋白的表达率分别达到最大值70.00%和84.00%。Bcl-2蛋白的表达加热组和对照组均呈阴性。4热疗对细胞形态学的影响倒置显微镜下观察,对照组Hep-G2细胞贴壁生长良好,呈梭形、多角形、大小不一,细胞形态完整,细胞核大,核仁明显。43℃水浴各组,生长状态发生改变,细胞皱缩、变圆,呈浮起状,核凝集,胞浆浓缩呈泡状,核仁消失,有的胞膜完整;有的细胞出现肿胀、胞膜破坏、连续性中断、细胞器破裂。透射电镜下可见对照组细胞形态正常,边界清楚,核大而圆,核仁、核膜清晰可见,常染色质丰富,异染色质少。加热组细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边集,呈新月形,核膜皱褶,胞质浓密,细胞器集中,核仁不规则或碎裂,胞质内有很多空泡形成。从电镜下观察加热细胞的超微结构的改变,可看出细胞呈凋亡形态的改变。结论:43℃水浴加热Hep-G2细胞,可诱使其产生凋亡,其机制可能通过促进Bax、p53蛋白表达,来诱导肝癌细胞凋亡。