基于新型米氏酸衍生物的生物胺定量分析研究

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胺类化合物是氨分子中的一个或者多个氢原子被烃基取代后所得到的产物,目前,大量研究表明绝大多数胺类化合物具有毒性。腐胺、尸胺是食品细菌性腐败的重要化学标志物,其含量可作为食品新鲜度的指标;丙烯酰胺、杂环胺等可能导致基因突变和癌症的发生;二级胺类化合物是环境危害和水体污染的重要标志物;儿茶酚胺类化合物是人体多种疾病的重要分析物。对胺类化合物进行高灵敏度、高选择性检测分析在食品安全、环境检测、临床诊断等各个领域都是至关重要的。但胺类化合物由于较强极性、高挥发性、强活泼性,结构中缺乏生色团或荧光团,在检测前一般需要进行衍生化处理。我们在研究中发现米氏酸类衍生试剂可在较温和条件下对胺类化合物进行高效标记,生成稳定性好且具有良好仪器响应的衍生化产物。基于此,本研究设计并合成了一种新型的米氏酸衍生试剂(BSMAD),并结合高效液相色谱?荧光(HPLC-FLD)检测法以及液相色谱-质谱(LC-MS)法,对一系列胺类化合物成功进行了高灵敏度、高选择性的定性、定量分析。主要工作如下:(1)合成了并表征了一种新型荧光衍生试剂BSMAD,并且探究了它与胺类化合物的衍生原理,并与基于其他衍生试剂的胺类分析方法进行了详细的比较,建立了BSAMD与三种二级胺类化合物的柱前衍生化方法,结合HPLC-FLD检测,实现了三种二级胺类化合物的高灵敏度测定。该方法具有灵敏度高(检测限在0.4?0.8 nmol·L-1之间),衍生条件温和,衍生效率高,生成的衍生化产物结构单一,且无需对样品进行萃取、纯化等额外处理等优点,缩短了分析流程,减少了分析时间。(2)建立了HPLC-FLD柱前BSMAD衍生化反应来分析6种生物胺的方法,结合LC-MS/MS检测,成功实现了6种毒性最强的生物胺的定量分析。该方法成功对黄酒、红酒、料酒、啤酒等实际样品中6种生物胺物质进行了测定,结果表明四种样品中均存在这6种生物胺,且含量在1.72?15.23μg·L-1之间,回收率在94.6%?100.5%之间。该方法灵敏度高(检测限在0.4?0.8 nmol·L-1之间),线性好(R~2≥0.9946),重复性好(日内RSD≤3.7%,日间RSD≤5.8%),样品前处理简单,与其它方法相比,BSMAD柱前衍生化方法简便、可靠、灵敏度高、干扰小,为今后不同基质中生物胺的研究提供了一种有效的方法。
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