二烯丙基二硫通过产生硫化氢抑制胃癌及其初步机制探讨

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目的:二烯丙基二硫(DADS)是大蒜中脂溶性物质的主要成分。研究发现DADS可以抑制多种肿瘤,并具有低毒性的优势,是一种极具开发潜力的抗肿瘤药物。本课题组前期研究证实了DADS能抑制人胃癌细胞的增殖,阻滞胃癌细胞于G2/M期,抑制胃癌细胞的EMT。硫化氢(H2S)是继NO和CO之后,人体内第三种重要的内源性气体信使分子。有研究证明,H2S对胃粘膜有保护作用并可以抑制癌症的生长。DADS是含硫化合物,可能作为H2S的供体。因此,我们探讨DADS是否通过产生H2S抑制胃癌细胞的生长并初步研究其机制。方法:本研究通过亚甲蓝法硫化氢检测试剂盒和荧光探针检测试剂盒检测各处理组人胃癌SGC-7901细胞中H2S含量情况;免疫荧光检测H2S生成关键酶CSE和CBS蛋白在细胞中的表达和定位;通过CCK8、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验、划痕实验、流式实验分别检测细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等方面对胃癌细胞的影响;加入CSE抑制剂PPG后,观察各处理组的变化情况;Western Blot检测相关蛋白在不同细胞和不同处理组的表达情况。从而研究DADS产生H2S的情况和H2S对胃癌细胞的影响。结果:1.亚甲蓝法和荧光探针实验均证明DADS在胃癌SGC-7901细胞中能产生H2S,其产生H2S的量与DADS的浓度有关。2.在胃癌SGC-7901细胞中分别加入DADS与NaHS后,DADS和NaHS组部分细胞形态由多边形转变成圆形或者椭圆形。3.免疫荧光实验发现CSE和CBS主要在细胞核表达。4.Western Blot检测CSE和CBS在胃黏膜细胞GES-1与胃癌SGC-7901、MGC-803细胞的表达和在胃癌SGC-7901细胞中不同处理组的表达,结果显示:CSE和CBS在胃黏膜细胞系中的表达比在胃癌细胞系高;在胃癌SGC-7901细胞中,DADS组的CSE表达最高,NaHS组最低。5.通过荧光探针检测细胞内H2S含量,发现加入CSE抑制剂PPG后,细胞内H2S含量明显降低。6.Western Blot和免疫荧光检测结果都证实PPG能明显减弱DADS引起的CSE升高。7.H2S可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡。8.DADS可抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡,H2S生成的抑制剂PPG可减弱DADS的以上作用。9.Western Blot检测各处理组中EMT相关通路蛋白的表达情况,结果显示:DADS组和NaHS组中E-Cadherin和Claudin-1的表达量升高,Slug的表达量降低。结论:1.DADS在胃癌SGC-7901细胞中能产生H2S,且H2S的生成量与DADS浓度有关。2.H2S可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖、迁移、侵袭,并促进其凋亡。3.DADS可通过产生H2S发挥抗胃癌作用,并且其机制与抑制EMT相关。
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