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奶牛产后子宫细菌感染会导致子宫内膜炎的发生,影响子宫复旧及卵巢功能,扰乱生理周期,导致生育力下降。大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）是引起奶牛子宫内膜炎的常见致病菌,其内毒素主要成分脂多糖（Popolysaccharides,LPS）可与Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）结合并激活MAPK和NF-κB信号通路,促进炎性因子的表达和释放。临床研究表明,孕酮可抑制奶牛子宫先天免疫,使产后子宫易受病原体侵袭。本课题组前期研究发现,孕酮可抑制炎性反应条件下奶牛子宫内膜上皮细胞（Bovine endometrial epithelial cells,BEEC）炎性因子基因表达和相关通路活化,但其对子宫内膜基质细胞（Bovine endometrial stromal cells,BESC）的作用机制尚不清楚。本研究选取体外培养的原代BESC为研究对象,分别使用热灭活E.coli（108 CFU/mL）和LPS（1μg/mL）建立细胞炎性模型,并与不同浓度的孕酮（1、3、5 ng/mL）共处理,检测MAPK和NF-κB通路及其下游炎性因子基因的表达,探究孕酮对BESC炎性反应的影响,为奶牛子宫内膜炎的防治提供理论依据。（1）孕酮单独处理对BESC炎性反应的影响使用1、3和5 ng/mL孕酮分别处理细胞12 h,采用qPCR法检测炎性因子基因IL1B、IL6、CXCL8、PTGS2、NOS2和TNF的表达;孕酮（1、3、5 ng/mL）处理细胞30 min,用Western Blot法检测MAPK和NF-κB信号通路关键蛋白的表达。结果表明,与空白对照组相比,孕酮处理组细胞除IL1B表达下调外（P＜0.05）,其余细胞因子的基因表达均无明显变化（P＞0.05）;孕酮对MAPK和NF-κB通路关键蛋白无明显影响（P＞0.05）。（2）孕酮对LPS和热灭活E.coli诱导的BESC NF-κB和MAPK信号通路的影响采用1 μg/mLLPS和不同浓度孕酮（1、3、5 ng/mL）共处理BESC,分别于45 min和60 min检测NF-κB和MAPK信号通路关键蛋白的磷酸化水平;用108CFU/mL热灭活E.coli处理细胞0、30、60、90和120 min,观察通路关键蛋白的时程变化规律;用108 CFU/mL热灭活E.coli与不同浓度孕酮共处理细胞120 min,检测通路关键蛋白变化;分别用LPS和热灭活E.coli与3 ng/mL孕酮共处理细胞45 min、120 min,用免疫荧光技术检测BESC P65蛋白核转位。结果表明,与空白对照组相比,LPS组细胞 P-P65/P65、P-IκBα/IκBα、P-ERK/ERK、P-JNK/JNK 和 P-P38/P38 的比值上升（P＜0.05）;与LPS组相比,共处理组细胞P65和IκBα以及ERK和P38的磷酸化水平下调（P＜0.05）,但JNK下调不显著（P＞0.05）。热灭活E.coli可诱导细胞MAPK和NF-κB通路活化,其中各关键蛋白磷酸化水平在120 min最高（P＜0.05）,因此选用120 min时间点进行后续实验;与热灭活E.coli处理组相比,共处理组细胞P65和IκBα以及ERK、JNK和P38的磷酸化水平下调（P＜0.05）。LPS和热灭活E.coli可促进NF-κB通路P65入核,加入3 ng/mL孕酮共处理可抑制由LPS或热灭活E.coli引起的P65核转位。（3）孕酮对LPS和热灭活E.coli诱导的BESC炎性因子基因表达的影响采用qPCR法检测L1B、IL6、CXCL8、PTGS2、NOS2和TNF基因的表达情况:使用 1μg/mLLPS 和孕酮（1、3、5 ng/mL）共处理 BESC 12 h、24 h;用 108CFU/mL热灭活E.coli处理细胞0、6、9、12、18和24 h,观察各炎性因子基因表达的时程变化规律;使用108 CFU/mL热灭活E.coli与不同浓度孕酮共处理BESC 18h、24h。结果表明,与空白对照组相比,LPS组细胞炎性因子基因表达量均升高（P＜0.05）,孕酮共处理组各炎性因子基因表达量较LPS组均有下降,除TNF外均差异显著;热灭活E.coli可促进细胞炎性因子基因的表达,其中各炎性因子基因在18h、24h表达量最高（P＜0.05）,故选择18 h、24 h作为后续实验的时间点;与热灭活E.coli处理组相比,共处理组细胞各炎性因子的基因表达量均下调（P＜0.05）。综上可见,孕酮单独处理BESC细胞,对细胞MAPK和NF-κB通路及其下游炎性因子基因IL6、CXCL8、PTGS2、NOS2和TNF的表达无显著影响;孕酮能够抑制LPS或热灭活E.coli诱导的BESC细胞炎性反应,其机制与MAPK和NF-κB通路被抑制有关。