环境因素对群体微生物中铜绿假单胞菌与其他微生物相互作用的影响及机理探究

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微生物是引起食品腐败变质最常见的因素,它给食品工业带来了巨大的经济损失。近年来,铜绿菌引起的食品腐败变质现象越来越受到重视,铜绿菌广泛存在于土壤、空气、水等环境中,常污染饮用水、肉制品、乳制品、新鲜蔬菜等。食品中多微生物引起的污染更为常见,其危害比单一微生物引起的污染更为严重。在食品加工过程中,各种环境因素影响着细菌的生长,如营养条件、pH环境、盐浓度等。因此,了解两种细菌之间的群体增殖特性及常见的环境因素对其相互作用的影响是治理铜绿菌与金葡菌混合污染的关键。本论文主要探究铜绿菌与食品中常见微生物的种间相互作用,同时以金葡菌为代表,研究不同的pH、氯化钠浓度、葡萄糖浓度及磷酸盐浓度等环境因素对铜绿菌与金葡菌相互作用的影响。并通过RT-qPCR技术从分子层面初步探究低磷酸盐浓度环境下铜绿菌毒性增强的机制。1.将铜绿菌分别与金葡菌、大肠杆菌、沙门氏菌、单增李斯特菌在游离态和被膜态中共培养,结果表明三株铜绿菌均能杀灭共培养体系中的大肠杆菌。而沙门氏菌、单增李斯特菌能够与三株铜绿菌共存7d以上。对于金葡菌10071和110749,铜绿菌ATCC27853和PAO1分别在2d和5d时杀灭游离态和被膜态体系中的金葡菌,而铜绿菌HQ仅能抑制金葡菌的生长,两者可共存7d以上。2.102株铜绿菌分别与金葡菌10071在游离态和被膜态中的群体增殖特性结果表明,67株铜绿菌对金葡菌具有杀灭作用,并且相比于游离态,杀灭被膜态中的金葡菌需要的时间更长;35株铜绿菌对金葡菌的生长仅有抑制作用。3.pH范围为5-9、葡萄糖浓度为0-10g/L、氯化钠浓度为0-40g/L、磷酸盐浓度为0-10g/L,铜绿菌ATCC27853、PAO1、△lasIrhlI、HQ和金葡菌10071的生长没有受到显著影响。4.培养基的pH、葡萄糖浓度和氯化钠浓度在不影响单独的铜绿菌与金葡菌生长的前提下,对铜绿菌与金葡菌的群体增殖结果没有影响。在低磷酸盐浓度环境下,HQ和△lasIrhlI的毒力增强,对金葡菌10071的作用结果由仅能抑制金葡菌的生长变成了杀灭共培养体系中的金葡菌。5.在铜绿菌HQ和△lasIrhlI分别与金葡菌10071共培养过程中,磷酸盐环境压力激活磷酸调节子PhoB-PhoR,从而激活IQS系统,在铜绿菌HQ中IQS系统向下激活PQS和RhlI/RhlR系统,在铜绿菌△lasIrhlI中,IQS系统向下激活PQS系统,毒力因子等的产生增加,最终使铜绿菌HQ和△lasIrhlI具有杀灭金葡菌10071的能力。6.金葡菌10071与铜绿菌HQ和△lasIrhlI共培养过程中,在游离态和被膜态中,磷酸盐浓度缺乏导致金葡菌10071的lrgAB基因显著下调,lrgAB基因负调控金葡菌的自溶,lrgAB基因的显著下调导致了金葡菌的自溶和死亡。
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