基于网络药理学探究疏肝化滞胶囊治疗NAFLD与AMPK信号通路的关系

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:LuYang
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目的:应用现代网络药理学技术,预测疏肝化滞胶囊治疗慢性非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用靶点与信号通路,进一步分析其作用机制,为临床应用提供新的生物学依据和诊疗思路。材料与方法:通过TCMSP数据库、ETCM数据库、BATMAN-TCM数据库、Pub Chem数据库、Swiss Target Prediction数据库以及查阅文献,查找疏肝化滞胶囊中七味中药的药物活性成分与靶点。再利用Genecards数据库和OMIM数据库,检索并筛选出NAFLD的靶标。利用Uniprot数据库及Venny平台进行疏肝化滞胶囊与NAFLD靶点的标准化及映射。登陆Cytoscape3.7.2平台,构建出疏肝化滞胶囊主要化学成分-靶点的网络图。利用STRING数据库进行药物靶蛋白-疾病靶蛋白PPI网络分析。利用DAVID数据库,对核心靶点进行GO、KEGG富集分析。通过Omishare云平台可视化,得到主要富集通路图。取健康的雄性大鼠30只,级别为SPF级,利用随机数字法分为三组,各10只。正常组给予普通饲料,模型组和疏肝化滞组给予高脂饲料喂养,喂养周期56d。根据NAFLD诊断标准确认造模成功后,算出大鼠所需药量,且大鼠灌胃体积为1ml/100g。疏肝化滞组给予中药复方灌胃,其余两组给予生理盐水灌胃,一日两次,灌胃持续28d,28d末处死大鼠并留取肝脏组织。利用PCR法检测肝组织中腺苷酸活化蛋白激酸(AMPK)基因表达;用ELISA法测定肝组织氧化应激反应因子超氧化物歧化酶(SOD)的水平。结果:经筛选后得到中药有效成分:半夏共有13个有效活性成分,柴胡有17个有效活性成分,丹参有65个有效活性成分,决明子有14个有效活性成分,山楂有6个有效活性成分,郁金包含15个有效活性成分,泽泻共有10个有效活性成分,总数共140个。继续收集筛选所得疏肝化滞胶囊靶点共有247个,非酒精性脂肪肝病的靶点共1107个。疏肝化滞胶囊与NAFLD的交集靶点共有103个。通过Cytoscape3.7.2平台,构建出主要化学成分-靶点的网络图。根据degree值得到前十的关键化合物有槲皮素、木犀草素、山奈酚、丹参酮、黄芩素等。通过PPI网络分析,得到蛋白互作网络图,并得到互作蛋白与核心基因。GO富集分析包括生物学过程化学应力的细胞应答、药物的应答、氧化应激的应答、脂多糖的应答、氧化应激的细胞反应等,KEGG富集分析包括AMPK信号通路、AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、HIF-1信号通路等。绘制靶点-通路相关联的网络图。得到核心靶点有AKT1、RELA、MAPK8、IKBKB、JUN、CHUK、TP53、CCND1、IL1B、CDKN1A、CASP3、EGFR、GSK3B等。核心通路为AMPK信号通路、AGE-RAGE信号通路、IL-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等。验证性研究结果显示,与正常组相比,模型组大鼠的肝脏组织SOD水平、AMPK基因表达量均有所降低(P<0.05);与模型组相比,疏肝化滞组大鼠的肝脏组织SOD水平、AMPK基因表达量均增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:疏肝化滞胶囊的作用机制,可能与AKT1、TP53、MAPK8等靶点有关,并且通过调控AMPK、AGE-RAGE、IL-17、肿瘤坏死因子、HIF-1等信号通路改善肝脏脂质代谢,抑制肝脏细胞脂肪变性,从而达到治疗NAFLD的作用。其中AMPK是疏肝化滞胶囊治疗NAFLD的核心通路之一;SOD是疏肝化滞胶囊与NAFLD的交集靶点以及互作蛋白之一。疏肝化滞胶囊通过上调AMPK、SOD水平,从而达到了改善肝脏脂肪变性的效果,起到了治疗NAFLD的作用。
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