论文部分内容阅读
合理加工和利用我国丰富的羽毛资源,既可以减少羽毛对环境的污染,又能为社会生产、畜牧业发展等提供蛋白质资源。用微生物降解羽毛角蛋白的方法既经济又环保,近来受到人们广泛地关注。目前发现的可降解羽毛角蛋白的微生物中细菌种类最多,尤以芽孢杆菌最多,但是现在发现的大多数菌种的酶活力不高,离工业应用要求还有不少的差距。以人工诱发突变为基础的微生物诱变育种,具有速度快、收效大、方法简单等优点,是实验室研究及工业生产中最常采用的优良菌株选育方式。由于紫外线(ultraviolet ray, UV)和微波诱变设备成本低,实验操作简单,常用作实验室诱变育种。烷化剂是芽孢杆菌诱变育种中最常使用的诱变剂,而硫酸二乙酯(diethyl sulfate,DES)又是最常用的烷化剂之一。诱变育种时一种诱变方法往往难以达到预期目的,可以采用使诱变方法之间具有协同作用的复合诱变。通过对紫外线、微波和DES诱变条件分别进行研究,得到了对NJQ3细菌最佳的诱变条件。原菌株在37℃、180r·min-1恒温摇床中培养8～12h后,制成菌悬液,紫外诱变时间为2min; DES最佳诱变条件为DES浓度1.5μL/mL,诱变时间为5min;而微波辐射试验中,采用低温热分散法,间断累积诱变时间1～8min,致死率在60%以下,因此并不适合作为NJQ3的诱变选育方法。诱变后的菌株以角蛋白培养基降解圈为初筛条件,发酵液的可溶性蛋白含量和降解率为复筛条件,经过筛选后紫外诱变筛选出4个菌株,但是传代三次后均失去了正突变性状；DES诱变后筛选出5个菌株,其中D3在传代三次后仍然具有正突变性状,而微波诱变没有得到正突变菌株。用紫外线和DES复合诱变菌株NJQ3,方法为紫外诱变2min,在37℃、180r·min-1恒温摇床中培养12小时后制成茵悬液,DES浓度1.5μL/mL,诱变5min。经过角蛋白培养基降解圈、可溶性蛋白含量和降解率三个指标的筛选,得到一个能够稳定传代10代以上的变异菌株YB5。YB5的降解圈角蛋白培养基直径为1.20cm,比原菌株提高了37.08%；可溶性蛋白含量3.84mg/L,提高了160.23%；降解率49.2%,提高了9.82%。