【摘 要】
：
猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是冠状病毒科,冠状病毒属成员,是影响我国生猪养殖业最重要的病原之一。PEDV主要感染新生仔猪,引起仔猪急性腹泻、呕吐等症状,死亡率可达100%。目前用于PEDV研究的猪肠道细胞系少,感染效率低。因此建立在体外可长期培养的类器官和细胞系用于PEDV的研究,对了解PEDV与宿主相互作用至关重要。本研究首先利用P
【基金项目】
：
上海市浦江人才计划（21PJ1416300）； 上海市自然科学基金项目（21ZR1477200）；
论文部分内容阅读
猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是冠状病毒科,冠状病毒属成员,是影响我国生猪养殖业最重要的病原之一。PEDV主要感染新生仔猪,引起仔猪急性腹泻、呕吐等症状,死亡率可达100%。目前用于PEDV研究的猪肠道细胞系少,感染效率低。因此建立在体外可长期培养的类器官和细胞系用于PEDV的研究,对了解PEDV与宿主相互作用至关重要。本研究首先利用PEDV发病猪的小肠内容物在Vero细胞上进行病毒分离,成功分离到一株PEDV毒株,命名为PEDV-SD。通过全序列引物设计、PCR及一代测序等方法获得了病毒的全序列,并对该病毒的S基因和全基因序列与国内外PEDV毒株序列比对并进行遗传进化分析,结果表明该株与经典毒株同源性高,属于G1b分支,然后通过间接免疫荧光实验、空斑试验、病毒生长曲线检测证实了该病毒株为非胰酶依赖性方式感染Vero细胞;随着干细胞培养技术的发展,3D类器官已成为研究多种病毒体外模型。为了建立用于PEDV感染的猪肠道类器官体外模型,从7日龄健康仔猪小肠中分离小肠隐窝干细胞,经过体外培养7天左右分化成具有肠道隐窝3D结构的猪小肠类器官,并可进行连续传代,使用分离的PEDV-SD病毒株感染传代培养的猪小肠类器官3D和2D细胞,通过间接免疫荧光试验证明PEDV-SD株在肠道类器官细胞上的感染;为了获得一株亲本的用于PEDV感染的猪肠道永生化细胞系,本研究进一步构建了CDK4和SV40 T的慢病毒载体（p LV-EF1a-CDK4-Puro和p LV-EF1a-SV40-T-Puro）,用293T细胞包装慢病毒,感染培养的猪肠道类器官细胞,通过嘌呤霉素筛选,Western blot检测,细胞2D连续传代培养,PEDV感染试验,免疫荧光检测等方法,成功获得过表达CDK4和SV40 T的猪肠道类器官,连续2D传代后成功在体外建立了用于PEDV感染的永生化的2D猪肠道上皮细胞系。综上所述,本研究从临床猪场分离到了一株非胰酶依赖感染的经典G1b分支的PEDV-SD毒株,证明经典PEDV在我国仍有存在,防控上仍需要兼顾;成功建立了可在体外长期培养的猪小肠道3D类器官和2D猪肠道上皮细胞系,建立了PEDV毒株感染猪肠道的体外模型,为PEDV的基础研究提供一种新的可再生的猪肠道体外3D和2D研究模型。
其他文献
萜类化合物（terpenoids）是一种广泛存在于所有生物体内的化合物,功能包括植物激素、蛋白质修饰试剂、抗氧化剂等。萜类合成酶（Terpene synthase,TPS）是催化合成萜类化合物的关键酶,TPS在植物的生长发育及抗性调节中发挥重要作用。为了研究被子植物TPS基因家族的进化历史,探究TPS基因在不同植物中的进化特征和功能,本研究对TPS基因家族的分子进化、基因结构、基因表达等进行了分析
MADS-box基因作为一类实行调控功能的转录因子在被子植物花器官发育过程中具有重要意义。该基因作为花器官身份基因,被分为A、B、C、D、E五类,其编码的蛋白质可以形成不同的蛋白多聚体,结合在DNA上影响下游各类花器官特征基因的表达,来决定不同花器官的形成。本研究利用生物信息学分析方法,对牛樟、鹅掌楸、蜡梅、鳄梨、胡椒、马兜铃和玉兰等木兰类植物的MADS-box基因进行鉴定和分析,研究MADS-b
目的：探讨经阴道超声与经腹联合超声在妇科常见急腹症中的应用价值及优势。方法：选取2019年1月—2020年12月北京大学第一医院密云区医院门诊超声科收治的妇科急腹症相关疾病患者84例为实验组，另随机选取以妇科急腹症就诊于我院急诊超声科的患者84例为对照组，并且经过手术及病理证实明确诊断妇科急腹症相关疾病患者进行回顾性对比分析。结果：实验组84例患者中，异位妊娠55例（误诊2例，漏诊0例，灵敏度96
城市绿地是具有独特生物和物理化学特性的生态系统,提供了丰富的生态系统服务,被认为具有显著的社会效益。同时也是城市居民活动的重要场所,与其健康息息相关。在绿地活动中,人们不可避免地与绿地植物、土壤发生接触,为微生物、抗生素抗性基因（ARGs）从环境向人类转移提供了潜在途径。然而,关于城市绿地微生物多样性及其潜在健康风险的研究还比较有限。因此,本研究收集了典型城市绿地类型中的植物叶际和土壤样本,通过结
禽腺病毒血清4型（Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）感染可引起鸡肝炎-心包积液综合征（Heatitis and hydro-pericardium syndrome,HHS）,并造成易感鸡较大的死亡率,给我国养禽业造成巨大的经济损失。近年来该病的研究已经取得了一定的进展,但是仍然还有许多问题未被阐明。前期我们实验室分离并鉴定了FAdV-4 NP株,建立了FAdV-
猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种以呕吐、腹泻和脱水为主要特征的肠道传染病。虽然各个年龄段的猪都能感染该病,并表现出不同的症状,但该病毒对小猪来说是最致命的,7日龄以内发病小猪的死亡率可以达到100%。PEDV于20世纪80年代首次传播到中国,自那时起,
土壤重金属含量不仅影响城市绿地生物的健康生长,也影响绿地土壤质量,进一步影响城市环境和居民健康。开展城市绿地土壤重金属污染评估,基于污染评估对评估结果进行敏感重金属分析、划分绿地安全城市;找出对绿地土壤影响较大的重金属元素、划分绿地安全城市,有利于了解当前城市绿地土壤质量水平,为后期土壤环境质量的治理和修复提供指导。根据当前的一些研究,绿地土壤的污染问题已经引起了高度重视。长江经济带以长江为依托,
城市微气候关乎人类健康与福祉,其质量很大程度上影响着人们生活质量的优劣。探究城市微气候精细化分区有助于人们更直观地辨识城市微气候的时空演变规律,从而采取相应的措施来改善和适应城市微气候环境,为提升生活品质和人居满意度提供理论支撑。综合考虑人居环境舒适度,本文选取温度、湿度、风速三个气象因子,运用温湿指数、风寒指数、穿衣指数的微气候综合舒适度评价模型对2013-2020年深圳市微气候分别进行时间尺度
水资源利用的紧迫性和水资源污染导致的恶性事件，使污水处理引起整个社会的重点关注。常规污水处理方法的处理质量和效率均不理想，还可能产生二次污染，在后续研究中微生物技术在环境污水处理中逐渐表现出优势，因此，研究者开始尝试将微生物技术应用到环境污水处理工作中。因此，文章针对我国水污染处理现状及技术进行简单阐述，分析微生物技术在环境污水处理中发挥的作用，并探讨微生物技术在环境污水处理中的具体应用，以期为相
本试验旨在研究饲粮中添加布拉迪酵母对安格斯犊牛生长性能、血清免疫指标、粪便菌群及血清代谢物的影响。试验选取24头（152±10）日龄、体重相近的健康安格斯犊牛,随机分为3组:对照组（CG组）、低剂量组（LG组）、高剂量组（HG组）,分别饲喂基础饲粮、基础饲粮+100 mg/kg布拉迪酵母、基础饲粮+200 mg/kg布拉迪酵母。预试期14 d,正试期56 d。结果如下:（1）试验28、56 d,与