丝裂原活化蛋白激酶MAP4K5对胃癌细胞生物学行为的影响

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目的:研究丝裂原活化蛋白激酶MAP4K5在胃癌组织中的表达情况以及通过过表达及沉默探究其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:1.通过运用Western-blot、Real-time PCR以及组织芯片结合免疫组化的方法检测胃癌组织及其配对的癌旁正常组织中MAP4K5的表达情况。2.构建MAP4K5稳定过表达及沉默表达的胃癌细胞株AGS和SNU216,并通过蛋白质印迹法(免疫印迹实验)验证MAP4K5过表达及沉默的效果。3.采用细胞划痕愈合实验、Transwell细胞迁移实验、Transwell细胞侵袭实验、细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)法、平板克隆形成实验和软琼脂集落形成实验检测MAP4K5过表达及沉默后,对胃癌细胞AGS和SNU216迁移、侵袭以及增殖能力的影响。结果:1.在组织芯片上的186例配对胃癌组织和癌旁正常组织中,MAP4K5在胃癌组织中的阳性率为6.3%,在癌旁正常组织中阳性率为62.4%,其差异具有统计学意义(*,p<0.05)。Western-blot及Real-time PCR结果显示:MAP4K5的蛋白及mRNA表达水平在胃癌组织中均比癌旁正常组织低。2.MAP4K5过表达及沉默后,实验组胃癌细胞AGS和SNU216在不同检测时间点的CCK-8值(OD450)、平板克隆形成实验中克隆形成的数目及大小、软琼脂集落形成实验中克隆形成率均与其相应的对照组无差别,结果不具有统计学意义。细胞划痕愈合实验中,划痕一定时间后拍照记录,MAP4K5过表达组的细胞划痕区较对照组宽大,而沉默组的细胞划痕区域比对照组狭小,差异具有统计学意义(*,p<0.05)。在Transwell细胞体外迁移实验、Transwell细胞体外侵袭实验中,培养一定时间后拍照记录,过表达组小室微孔膜下层细胞的数目减少,而沉默组小室微孔膜下层细胞的数目增加,差异具有统计学意义(*,p<0.05)。结论:1.胃癌组织中MAP4K5的表达水平明显降低;2.MAP4K5可抑制胃癌细胞的迁移侵袭,但对其增殖无影响。
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