目的:检测进展期胃癌原发灶及其转移淋巴结癌细胞中上皮型钙粘蛋白(E - Cadherin ,E - Cad)、β-链蛋白(β-catenin,β-Cat)及其各自mRNA表达,探讨E-cadherin及β-catenin与胃癌转移的关系,从而为胃癌分子水平的诊断、治疗提供依据及线索。方法:采用免疫组化过氧化物酶标记链霉卵白素法(SP)观察比较E-cadherin及β-catenin在42例进展期胃癌原发灶及转移淋巴结癌细胞中的表达,采用Western-blot法检测E-cadherin及β-catenin蛋白的表达量,同时用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测上述标本中E-cadherin及β-catenin基因水平的变化,并结合分化程度、组织学类型、肿瘤浸润深度、肿瘤大小等临床病理因素进行综合分析。结果:(1)E-cadherin免疫阳性产物为棕黄色颗粒, E-cadherin染色定位于细胞膜,即连续的细胞膜染色。β-catenin在正常胃黏膜上皮细胞中主要定位于细胞膜,在胃癌组织和淋巴结转移灶中的癌细胞则表现为胞膜染色明显减弱或缺失。在42例患者中,E-cadherin在肿瘤原发灶只有4例正常表达,38例不正常表达,异常表达率为90.5%,E-cadherin在转移淋巴结内癌细胞中再表达阳性率为28.6% (12/42)。E-cadherin在转移淋巴结癌细胞中的再表达与肿瘤细胞的分化程度密切相关,在高分化胃癌转移淋巴结癌细胞中再表达阳性率为45.5% (10/22),在中低分化胃癌转移淋巴结癌细胞中的表达阳性率为10.0% (2/20),二者差异显著(P < 0.05);E-cadherin在转移淋巴结癌细胞中的再表达与胃癌肿瘤细胞的病理类型无关,在管状及乳头状腺癌再表达阳性率为25.0%(7/28),黏液腺癌的再表达阳性率为35.7%(5/14),两者之间无统计学意义(P >0.05)。在42例患者中,β-catenin在肿瘤原发灶有8例正常表达,34例不正常表达,异常表达率为80.9%(34/42),β-catenin在转移淋巴结内癌细胞中再表达阳性率为52.4% (22/42)。β-catenin在转移淋巴结癌细胞中的再表达与肿瘤细胞的分化程度密切相关,在高分化胃癌转移淋巴结癌细胞中再表达阳性率为72.7%(16/22),在中低分化胃癌转移淋巴结癌细胞中的表达阳性率为30%(6/20),二者差异显著(P < 0.05);β-catenin在转移淋巴结癌细胞中的再表达与胃癌肿瘤细胞的病理类型无关,在管状及乳头状腺癌再表达阳性率为60.7%(17/28),黏液腺癌的再表达阳性率为35.7(5/14),两者之间无统计学意义(P >0.05)。(2) E-cadherin、β-catenin和β-actin引物的扩增基因片段经电泳和EB染色后可见清晰电泳条带,其扩增片段大小与所设计的大小完全一致,分别为252 bp、200 bp、300 bp。E-cadherin mRNA表达量相对值在胃癌原发灶和正常胃粘膜中分别是(0.7441±0.0114)和(0.8037±0.0114),两者比较有统计学意义。E-cadherin mRNA在原发灶及转移淋巴结组织中的表达量分别为(0.7441±0.0114)和(0.7555±0.010),两者比较有统计学意义。E-cadherin mRNA表达量相对值在中低分化及高分化转移淋巴结组织中分别是(0.7518±0.0095)和(0.7596±0.0096),两者比较有统计学意义。E-cadherin mRNA表达量相对值在管状及乳头状腺癌转移淋巴结中是(0.7582±0.0084),在粘液腺癌转移淋巴结中是(0.7502±0.0112),两者比较有统计学意义。β-catenin mRNA表达量相对值在胃癌原发灶和正常胃粘膜中分别是(0.6071±0.1054)和(0.8123±0.0115),两者比较有统计学意义。β-catenin mRNA在原发灶及转移淋巴结组织中的表达量分别为(0.6071±0.1054)和(0.765±0.177),两者比较有统计学意义。β-catenin mRNA表达量相对值在中低分化及高分化转移淋巴结组织中分别是(0.558±0.142)和(0.7623±0.1486),两者比较有统计学意义。β-catenin mRNA表达量相对值在管状及乳头状腺癌转移淋巴结中是(0.6804±0.1799),在粘液腺癌转移淋巴结中是(0.6807±0.1756),两者比较有统计学意义。(3) 42例胃癌患者原发灶及转移淋巴结均检测到不同程度的E-cadherin及β-catenin蛋白表达。通过Optimas 6.0蛋白印记分析软件对所有病例的蛋白条带进行分析后发现, E-cadherin在原发癌组织中的蛋白相对强度为6～113.8(60.80±26.1) ,转移淋巴结组织中蛋白相对强度为16～158.2(88.3±38.87),原发癌组织中E-cadherin蛋白表达相对强度低于转移淋巴结组织。在中低分化和高分化转移淋巴结中E-cadherin蛋白相对强度分别为16～108.4(68.4±42.9)、96.7～29.70(105.2±42.3),二者间蛋白表达相对强度差异具有统计学意义。在管状及乳头状腺癌转移淋巴结中E-cadherin蛋白相对强度为25～158.2(94.36±29.7),黏液腺癌转移淋巴结中E-cadherin蛋白相对强度为16～145.6(61.04±46.19),二者比较有统计学意义。β-catenin在原发癌组织中的蛋白相对强度为21～132(58.69±30.3) ,转移淋巴结组织中蛋白相对强度为16～101(63.67±25.9),原发癌组织中β-catenin蛋白表达相对强度低于转移淋巴结组织。在中低分化和高分化转移淋巴结中β-catenin蛋白相对强度分别为16～101(53.05±25.17)、35～101(73.32±23.2),二者间蛋白表达相对强度差异具有统计学意义。在管状及乳头状腺癌转移淋巴结中β-catenin蛋白相对强度为20～101(65.61±27.25),黏液腺癌转移淋巴结中β-catenin蛋白相对强度为16～101(59.79±23.63),二者比较有统计学意义。(4)应用关联性检验比较转移淋巴结中E-cadherin、β-catenin蛋白再表达,得出χ~2 = 6.453 P < 0. 05,转移淋巴结中E-cadherin与β-catenin蛋白再表达有关联,Pearson列联系数C=0.927结论: E-cadherin、β-catenin与胃癌的发生、发展和转移密切相关;胃癌原发灶E-cadherin表达降低、β-catenin异位表达,在转移淋巴结中出现高的再表达阳性率,说明原发灶的形成是由于E-cadherin缺失及β-catenin异位表达造成的,而癌细胞在转移部位的再聚集和生长与E-cadherin及β-catenin再表达有关。通过RT-PCR、western-blot对E-cadherin在基因水平和蛋白水平的检测,揭示E-cadherin及β-catenin在转移灶中的再表达是由于基因突变造成的。同时E-cadherin的表达还与胃癌的分化程度和组织学类型密切相关,与肿瘤的大小和浸润深度无关,β-catenin的表达与胃癌的分化程度、浸润深度有关,与组织学类型、肿瘤的大小无关。应用关联性检验比较转移淋巴结中E-cadherin、β-catenin蛋白再表达,得出转移淋巴结中E-cadherin与β-catenin蛋白再表达有关联,Pearson列联系数C=0.927,从而得知在进展期胃癌转移淋巴结中E-cadherin与β-catenin共同发挥粘附作用,促进癌细胞与受侵组织的细胞粘附,使得癌细胞能够定植于受侵组织,开始增殖、侵袭。