酚磺乙胺的检测方法及方法学验证

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止血药物根据凝血机制的不同主要分成四类:促凝血因子活性药、降低毛细血管通透性药、抗纤维蛋白溶解药和其他外用止血药。酚磺乙胺是临床上常用的促凝血类止血药,具有降低毛细血管壁的通透性,促进血小板释放凝血活性物质,进而实现止血的功效。为使酚磺乙胺的应用达到理想效果,确定精准测定酚磺乙胺含量的方法及方法学验证的课题。目前应用于分析检测的方法有很多,光谱分析凭借更好的灵敏度、高效性以及选择性成为分析检测的热门领域。其中共振光散射光谱法和可见分光光度法大量应用于药物分析、食品分析、材料分析等领域,但应用于酚磺乙胺的含量测定鲜有报道,且所用的分析方法年代久远,如今药物分析的检测手段日新月异,本文开创了蛋白酶、蛋白质、生物碱和有机酸等应用共振光散射光谱法测定酚磺乙胺的含量以及新铜试剂、2-2联吡啶三元体系测定酚磺乙胺含量的可见分光光度法,成功应用于酚磺乙胺的含量测定,取得了较为满意的实验结果。具体内容如下:(1)基于两种蛋白质或蛋白酶与酚磺乙胺的缔合反应或超分子反应的机理,分别建立了三种共振光散射光谱测定酚磺乙胺的含量的新方法。在常温条件下,酚磺乙胺分别与牛血清白蛋白、人血清白蛋白和胰蛋白酶在Britton-Robinson缓冲液中发生反应,均使得共振光散射信号显著增强,在不断的优化反应条件下,牛血清白蛋白测定酚磺乙胺含量的线性范围为0.06~0.11 mg·L-1,相关系数R为0.9993,检出限为0.002 mg·L-1;人血清白蛋白测定酚磺乙胺含量的线性范围为0.02~0.09 mg·L-1,相关系数R为0.9995,检出限为0.008mg·L-1;胰蛋白酶测定酚磺乙胺含量的线性范围为0.02~0.12 mg·L-1,相关系数R为0.9998,检出限为0.007 mg·L-1。(2)基于草酸、壳聚糖、阳离子表面活性剂氯化十六烷基吡啶和盐酸小檗碱与酚磺乙胺的缔合反应,分别建立了四种共振光散射光谱测定酚磺乙胺含量的新方法。在Britton-Robinson缓冲介质中,在常温条件下,基于静电结合形成缔合物的机理,酚磺乙胺分别于草酸、壳聚糖、氯化十六烷基吡啶和盐酸小檗碱静电结合,均引起共振光散射信号强度显著增强。草酸测定酚磺乙胺的线性范围为0.1~0.8 mg·L-1,相关系数R为0.9995,检出限为0.012 mg·L-1;壳聚糖测定酚磺乙胺的线性范围为0.1~0.8 mg·L-1,相关系数R为0.9994,检出限为0.029 mg·L-1;氯化十六烷基吡啶在249 nm处测定酚磺乙胺的线性范围为0.3~0.9 mg·L-1,相关系数R为0.9971,检出限为0.034 mg·L-1,在272 nm处测定酚磺乙胺的线性范围为0.1~0.8 mg·L-1,相关系数R为0.9998,检出限为0.022 mg·L-1;盐酸小檗碱测定酚磺乙胺的线性范围为0.02~0.10 mg·L-1,相关系数R为0.9994,检出限为0.013 mg·L-1。(3)基于酚磺乙胺的还原性,分别建立了Cu(I)-新铜试剂配合物和Fe(II)与2-2联吡啶配合物可见分光光度测定酚磺乙胺含量的两种新方法。在常温下,Britton-Robinson缓冲介质中,基于Cu(Ⅱ)与酚磺乙胺发生氧化反应,新生的Cu(I)与新铜试剂发生配位显色反应形成配合物,Fe(Ⅲ)与酚磺乙胺发生氧化反应,新生的Fe(II)与2-2联吡啶发生配位显色反应形成配合物,两种体系的吸光度均显著增强。新铜试剂测定酚磺乙胺的线性范围为2.5~20 mg·L-1,相关系数R为0.9997,检出限为0.011 mg·L-1;2-2联吡啶在350 nm处测定酚磺乙胺的线性范围为2.5~15 mg·L-1,相关系数R为0.9996,检出限为0.008 mg·L-1,在523 nm处测定酚磺乙胺的线性范围为2.5~20 mg·L-1,相关系数R为0.9996,检出限为0.006mg·L-1。
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