本文以多浪羊外周血淋巴细胞为实验材料,采用SMART技术,构建了多浪羊外周血淋巴细胞的cDNA文库,用地高辛标记的IL-8探针与构建的文库进行核酸杂交筛选,并对筛选结果进行了初步分析。首先,从多浪羊外周血中分离淋巴细胞,用Trizol提取多浪羊外周血淋巴细胞的总RNA,逆转录合成了第一链cDNA,LDPCR扩增后获得双链DNA,采用蛋白酶K和Sfi I消化,产生的接头和cDNA片段经CHROMA SPIN-400柱离心分离,收集400bp以上的cDNA片段,然后将这些外源片段与λTriplEx2 Vector载体连接后转染噬菌体,测定初始文库滴度,之后进行文库扩增。结果表明,构建的cDNA文库初始滴度为5.6×107pfu/mL,克隆文库滴度为1.5×10pfu/mL。由此结论说明所构建的多浪羊外周血淋巴细胞cDNA文库容量符合文库构建的标准,该cDNA文库可以方便地从中筛选所需的目的基因,更为重要的是可以用于分离全长基因,为更进一步开展基因功能研究奠定基础。以地高辛标记的IL-8基因为探针,在多浪羊外周血淋巴细胞cDNA文库中进行非特异性筛选免疫应答相关基因,经2轮筛选挑取阳性克隆菌送测序,获得了 7个与多浪羊IL-8免疫相关基因。经DNAtools软件分析筛选到的阳性克隆核酸序列,并登陆NCBI BLAST分别对筛选所得基因进行核酸同源性检索与蛋白质相似性比较,登录Expasy tools分析氨基酸序列,经分析说明筛选得到的基因分别是葡萄糖磷酸异构酶(GPI)、辅酶Q-细胞色素C还原酶(UCR)、泛素、EF手钙结合基序(EFh)、血红素蛋白(Globin)、核糖体(Riboso-mal),均为协助IL-8基因的合成或发挥其免疫应答有关的基因。