【摘 要】
：
目的微囊藻毒素-LR（microcystin-leucine arginine,MC-LR）是水环境中常见的污染物,具有雄性生殖毒性。流行病学研究发现MC-LR能进入人类精液,可能导致精子运动力下降。但是MC-LR如何降低人精子运动力,损害其功能,还尚不明确。本研究旨在探讨MC-LR对人类精子运动能力的影响及其可能途径,为MC-LR致雄性生育能力下降提供新见解。方法1.精液收集和精子获取人类精液由
论文部分内容阅读
目的微囊藻毒素-LR（microcystin-leucine arginine,MC-LR）是水环境中常见的污染物,具有雄性生殖毒性。流行病学研究发现MC-LR能进入人类精液,可能导致精子运动力下降。但是MC-LR如何降低人精子运动力,损害其功能,还尚不明确。本研究旨在探讨MC-LR对人类精子运动能力的影响及其可能途径,为MC-LR致雄性生育能力下降提供新见解。方法1.精液收集和精子获取人类精液由河南省人类精子库的供精志愿者提供。利用Percoll分离法将精液样品中的精子分离并收集。将精子放置于含有不同浓度MC-LR（0、1、10、100μg/L）的精子培养基暴露1、2、4、6小时或6小时进行后续实验。2.MC-LR暴露后MC-LR进入人类精子情况的检测Western blot检测MC-LR暴露后MC-LR进入人类精子内的情况;免疫荧光观察MC-LR的分布位置。3.MC-LR对人类精子运动等指标影响的检测人类精子暴露于不同浓度（0、1、10、100μg/L）的MC-LR不同时间（1、2、4、6小时）后,用伊红-苯胺黑染色法检测人类精子存活率的变化;用计算机辅助精子分析仪检测人类精子运动指标（精子前向运动力、曲线速率和线性指数等）的变化;用金霉素染色法检测人类精子获能和顶体反应的变化。4.MC-LR对人类精子超微结构及鞭毛运动相关分子影响的检测MC-LR暴露6小时后人类精子运动等能力出现明显损伤。为探究MC-LR对人精子运动能力影响的可能途径,后续暴露时间选择为6小时。透射电镜观察人类精子超微结构的变化;免疫荧光观察精子鞭毛运动相关分子的分布位置;RT-q PCR和Western blot检测精子鞭毛运动相关分子水平变化。5.MC-LR对人类精子Ca2+/CAMKKβ通路影响的检测流式细胞仪检测人类精子中Ca2+含量;Western blot检测CAMKKβ通路相关蛋白CAMKKβ、P-CAMKKβ、AMPK、P-AMPK的表达情况。结果1.MC-LR能够进入人类精子内并且主要分布于颈部和鞭毛Western blot结果显示MC-LR暴露后人类精子中可检测到MC-LR,表明MC-LR能够进入人类精子内;免疫荧光结果显示MC-LR主要分布于人精子颈部和鞭毛。2.MC-LR降低人类精子存活率、运动能力和获能率在1、2、4、6小时,随着MC-LR暴露浓度的升高,人精子存活率逐渐降低,并且呈剂量依赖性。当暴露6小时,与同期对照组相比,100μg/L MC-LR组中人类精子存活率显著降低（P＜0.05）。在1小时,MC-LR对人精子运动指标无明显影响。随着MC-LR暴露浓度和时间的增加,人精子前向运动力逐渐降低。当暴露6小时,与同期对照组相比,10和100μg/L MC-LR组中人类精子前向运动力、曲线速率和线性指数显著降低（P＜0.05）。在1小时,MC-LR对人精子获能率无明显影响。在2、4和6小时,随着MC-LR暴露浓度的增加,人类精子获能率逐渐下降。在6小时,1、10和100μg/L MC-LR组获能率出现显著下降（P＜0.05）。不同浓度和时间MC-LR暴露对人类精子发生顶体反应无明显影响。以上结果表明MC-LR暴露可降低人类精子存活率、运动能力和获能率。3.MC-LR损伤人类精子鞭毛超微结构并降低鞭毛运动相关分子水平透射电镜结果显示,MC-LR暴露6小时后人类精子鞭毛中9对双联微管和2个中央微管排列紊乱、分布不对称,个别微管出现缺失。免疫荧光结果显示,DNAH17和SPEF2都存在于人精子鞭毛中。MC-LR暴露6小时后人精子鞭毛运动相关分子DNAH17、SPEF2、SPAG16、SPAG6、CFAP44的m RNA含量和蛋白水平显著降低（P＜0.05）。以上结果表明MC-LR能够降低鞭毛运动相关分子水平,损伤人类精子鞭毛超微结构。4.MC-LR抑制人类精子中Ca2+/CAMKKβ通路MC-LR暴露6小时后,与对照组相比,1、10和100μg/L MC-LR组中Ca2+的含量显著降低（P＜0.05）。MC-LR剂量依赖性降低CAMKKβ和AMPK蛋白磷酸化水平（P＜0.05）。以上结果表明MC-LR暴露能够抑制人类精子中Ca2+/CAMKKβ通路。结论1.MC-LR可进入人类精子中并降低其运动能力和获能率。2.MC-LR能够损伤人类精子鞭毛超微结构和抑制Ca2+/CAMKKβ通路,这些可能参与MC-LR降低人类精子运动能力的过程。
其他文献
随着我国经济的高速发展,成品油市场蓬勃发展,但由于成品油市场的监管不严等原因,滋生了许多违法违规的黑加油站。受国际形势和全球新冠疫情的影响,油价大幅上涨,黑加油站现象也愈演愈烈。这些黑加油站或无证经营,或销售质量不合格的油品,或存贮油品条件不达标准,不仅严重扰乱了正常的成品油市场经济秩序,并且对周边的公共安全造成巨大威胁。为打击黑加油站现象,全国各地自上而下采取积极行动,虽取得了一定成效,但市面上
随着社会经济的发展,城市化进程的加速,由于出行需求在城市中分布不均匀、城市交通系统的在时间和空间上的利用不均等导致严重的交通拥堵,已经严重限制了城市的健康发展。交通小区是研究城市交通系统的基本单元,其划分需要满足同质性和空间连续性的原则,空间约束聚类方法把地理信息和空间邻接关系融入到聚类过程中,能够平衡聚类结果的空间连续性和同质性,为交通小区划分提供新的思路。本文以成都市滴滴出行网约车订单数据和兴
种业是国家的基础性、战略性产业,是保障国家粮食安全的根本。种质资源是种业发展的基石,是国家战略性资源,事关种业振兴全局。目前,我国种质资源知识产权的法律保护体系主要问题表现在:立法中相关核心概念界定不清、农民留种问题过于框架化、国内外法律适用标准不统一;司法中裁判法律依据制度落后、部分判定自由裁量权过大、非法代繁侵权行为认定难;行政管理中农业和林业行政管理不统一、行政责任主体不明确、执法机构冗杂;
超高性能混凝土（Ultra-High Performance Concrete,UHPC）以其优异的力学性能和耐久性能,被逐渐应用于土木工程的各个领域。但伴随而来的高水泥用量,以及微观结构高致密性所带来的易高温爆裂等缺点和危害,是UHPC亟需解决的问题。因此,本文在已有研究的基础上,系统探讨了绿色矿物掺合料再生砖粉（Recycled Brick Powder,RBP）和秸秆灰（Straw Ash,
目的:通过对河南省焦作市某奶牛养殖场工人和附近村民口咽部及肠道细菌群落组成和抗生素抗性基因（Antibiotic Resistance Genes,ARGs）的分布特征进行比较;分析了细菌群落和ARGs分布在养殖场工人体内、动物粪便和空气之间关系,以探究养殖场暴露对工人口咽部和肠道细菌群落组成和ARGs分布的影响;探讨ARGs在养殖场环境、动物和人群间的转移规律,从而为养殖场环境健康风险评价以及职
随着城市化和工业化进程的不断加快,中国已成为全球范围内大气污染最严重的国家之一,对气候变化和人类健康产生了不利影响。同时,在城镇化背景下,土地利用/土地覆盖正在以城市扩张、侵占农田、植被减少的形式发生巨大变化,直接或间接影响了大气污染物的沉降和扩散,进而导致大气环境进一步恶化。气溶胶光学厚度（Aerosol Optical Depth,AOD）是量化大气浊度和大气污染的主要物理指标之一。因此,了解
目的本研究全面分析2005-2020年中国居民意外伤害（道路交通事故、意外跌落、溺水、意外中毒、火灾）死亡趋势并预测2021-2025年五种意外伤害死亡情况,以期为今后我国意外伤害死亡的防控工作提供有益参考。方法收集《中国死因监测数据集》中中国居民2005-2020年意外伤害（道路交通事故、意外跌落、溺水、意外中毒、火灾）的死亡数据,计算各年份不同年龄组、性别、城乡和地区粗死亡率和标化死亡率,采用
目的环境铅污染可通过多种途径进入机体,诱发神经毒性。海马突触可塑性异常是铅致学习记忆损伤的主要病理机制,但其分子机制尚未完全阐明。研究发现,SIRT1参与大脑各项生物学功能且具有神经保护作用。本课题组前期研究发现,激活SIRT1逆转了铅暴露大鼠海马突触蛋白的表达,从而减轻铅暴露大鼠学习记忆能力损伤。本研究通过建立体内和体外铅暴露模型,观察激活SIRT1对突触可塑性相关基因及其DNA甲基化水平的影响
目的矽肺是目前危害最为严重的职业病。以往研究认为,肺泡Ⅱ型上皮细胞（typeⅡalveolar epithelial cells,AECⅡ）经过上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）为肺成纤维细胞矽肺纤维化的关键环节之一。近年来报道,腺苷A2a受体（adenosine A2a receptor,A2aR）与多种疾病中EMT的发生发展联系密切,可
目的基于河南省某大型三甲综合医院2018-2020年度出院的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者病案信息资料,了解患者基本情况,并在筛选出住院费用影响因素的基础上,深入挖掘各因素与超限住院费用之间的强关联规则。为医疗部门控制住院费用提供针对性措施及预警信息,降低HCC患者出现住院费用超限的概率,从而切实减轻HCC患者疾病经济负担。方法采用回顾性调查方法,共纳入2