【摘 要】
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烟曲霉是一种临床上常见的条件致病菌,其感染引发的曲霉病致死率很高。烟曲霉细胞壁结构主要由几丁质和葡聚糖共价结合形成的多糖骨架以及其中嵌合的蛋白组成,因其对人细胞的独特性和重要的自身保护功能,一直是抗真菌感染药物研制的理想药靶。多糖脱乙酰酶是一种参与多糖代谢过程的重要水解酶,属于糖酯酶家族4(CE4),其中包括几丁质脱乙酰酶、壳寡糖脱乙酰酶NodB、肽聚糖脱乙酰酶、乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶。我们利用
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烟曲霉是一种临床上常见的条件致病菌,其感染引发的曲霉病致死率很高。烟曲霉细胞壁结构主要由几丁质和葡聚糖共价结合形成的多糖骨架以及其中嵌合的蛋白组成,因其对人细胞的独特性和重要的自身保护功能,一直是抗真菌感染药物研制的理想药靶。多糖脱乙酰酶是一种参与多糖代谢过程的重要水解酶,属于糖酯酶家族4(CE4),其中包括几丁质脱乙酰酶、壳寡糖脱乙酰酶NodB、肽聚糖脱乙酰酶、乙酰木聚糖酯酶和木聚糖酶。我们利用生物信息学方法在烟曲霉基因组中找到了7个与CE4保守区域NodB有高同源性的蛋白编码基因cod1-cod7。本研究中,我们克隆了 cod4基因并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中成功得到表达,表达蛋白分子量为35.2kDa,质谱鉴定为烟曲霉COD4蛋白。通过亲和层析获得了纯度较高的重组蛋白,又运用离子交换层析和分子筛层析获得了可以满足结晶要求的高纯度蛋白。底物特异性分析显示,COD4能够催化水解聚合度为2-3的几丁质寡糖的乙酰基水解,对聚合度为5以上的几丁质寡糖无活性。同时,我们构建了 cod4回复突变株和cod4/cod7双敲除突变株,为进一步的功能研究奠定了基础。综合目前我们对COD4的初步生化与遗传分析,推测COD4与烟曲霉菌丝生长过程中细胞壁几丁质的降解相关。
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