【摘 要】
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[目 的]糖尿病性心肌病（Diabetic Cardiomyopathy,DCM）是导致糖尿病患者死亡的重要原因,目前临床上缺少有效的防治药物。本文旨在研究灯盏乙素（Scutellarin,Scu）减轻高糖诱导的心肌细胞损伤的机制,为其治疗DCM提供科学的基础研究理论依据。[方法]1.采用H9c2大鼠心肌细胞系作为研究对象,分为正常组、模型组、Scu 50 μM处理组、Scu 100 μM处理组、
【基金项目】
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云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项资金项目（2019FE001）；
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[目 的]糖尿病性心肌病（Diabetic Cardiomyopathy,DCM）是导致糖尿病患者死亡的重要原因,目前临床上缺少有效的防治药物。本文旨在研究灯盏乙素（Scutellarin,Scu）减轻高糖诱导的心肌细胞损伤的机制,为其治疗DCM提供科学的基础研究理论依据。[方法]1.采用H9c2大鼠心肌细胞系作为研究对象,分为正常组、模型组、Scu 50 μM处理组、Scu 100 μM处理组、Scu 200 μM处理组、Scu 400 μM处理组和姜黄素处理组。H9c2心肌细胞培养24 h,细胞的生长密度达到90%左右,将正常组和模型组的培养基换成正常培养基,Scu各浓度处理组换成含有不同浓度Scu的培养基（50/100/200/400 μM）,姜黄素处理组换成含有4 μM姜黄素的培养基,继续培养4 h。4 h后正常组继续正常培养基培养,其它处理组换成含100 mM高糖（HG）培养基,继续培养48 h。观察细胞形态,用CCK8试剂盒检测各处理组的细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况和ROS的生成量;Western blotting（WB）和免疫荧光（Immunofluorescence,IF）检测凋亡相关因子（Procaspase 3、Procaspase 9、Procaspase 12、Bcl-2 和 Bax）、部分活性片段（Cleaved-Caspase 3和Cleaved-Caspase 9）和ROS合成的关键基因（Nox2和Nox4）的蛋白表达。2.APX-115 free base是Nox抑制剂,能有效抑制Nox2和Nox4。本实验采用H9c2大鼠心肌细胞系作为研究对象,分为正常组、APX-115处理组、HG处理组、APX-115+HG处理组。培养24 h,细胞密度达到90%左右,正常组和HG处理组细胞继续用正常培养基培养,APX-115处理组和APX-115+HG处理组换成含有5 μM的APX-115 free base抑制剂的培养基培养2 h。2 h后正常组和APX-115处理组换成正常培养基继续培养,HG处理组和APX-115+HG处理组换成HG培养基继续培养48 h。观察细胞形态,用CCK8试剂盒检测各处理组的细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞ROS的生成量;WB和IF检测Nox2和Nox4的蛋白表达。[结 果]1.与正常组比较,模型组中的细胞数量减少,细胞形态亦有所改变。CCK8和流式细胞仪的检测结果表明:相比于正常组,模型组的细胞增殖活力显著降低（P＜0.01）,ROS的生成量和细胞凋亡率均显著增加（P＜0.01）;与模型组相比,Scu各浓度处理组和姜黄素处理组的细胞增殖活力均上升,其中Scu 400 μM时,P＜0.05,其它浓度P＞0.05,均无统计学意义,ROS生成和细胞凋亡率均显著下降（P＜0.01）。WB和IF结果显示:与正常组相比,模型组的凋亡主要相关因子（Procaspase 3、Procaspase 9、Procaspase 12、Bcl-2 和 Bax）、部分活性片段（Cleaved-Caspase 3 和 Cleaved-Caspase 9）和 ROS 合成的关键基因（Nox2 和Nox4）的蛋白表达水平均上调（P＜0.05）,与模型组比,Scu各浓度处理组和姜黄素处理组的上述相关因子及活性片段蛋白表达水平均下调（P＜0.05）。2.与正常组比较,APX-115处理组的细胞数量减少,细胞形态轻微改变,HG处理组细胞数量减少,形态发生改变,APX-115+HG处理组的细胞数量和形态均有所恢复。CCK8和流式细胞仪检测结果表明:相比于正常组,APX-115处理组和HG处理组的细胞增殖活力均下降（P＜0.05）,ROS含量均显著上升（P＜0.01）;相比于HG处理组,APX-115+HG处理组的细胞增殖活力上升（P＞0.05）,ROS含量下降（P＞0.05）,无统计学意义。WB和IF结果显示:与正常组相比,APX-115处理组的Nox2和Nox4蛋白表达水平均下调（P＜0.05）,HG处理组的蛋白表达水平均明显上调（P＜0.01）;与HG处理组相比,APX-115+HG处理组上述两个因子的蛋白表达水平均下调（P＜0.05）。[结论]1.高糖可以引起Nox（Nox2和Nox4）的表达上调,增加ROS的生成量,诱发氧化应激,损伤心肌细胞。2.灯盏乙素具有减轻高糖引起的心肌细胞损伤的作用,这可能是通过调控心肌细胞多种相关凋亡因子（Procaspase 3、Cleaved-Caspase 3、Procaspase 9、Cleaved-Caspase 9、Procaspase 12、Bcl-2 和 Bax）和抑制 Nox（Nox2 和 Nox4）的蛋白表达水平,发挥降低心肌细胞凋亡和抑制氧化反应的作用而实现的,提示灯盏乙素可能是一种防治DCM的新的潜在的药物。
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