鹦哥岭土壤来源放线菌YG-7的次生代谢产物及其生物活性研究

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放线菌分布广泛,种类繁多,是一类特殊的细菌,因其能够产生活性独特、结构新颖、丰富多样的次生级代谢产物,被称为“生物合成机器”。放线菌是一类具有市场价值的微生物,在农业领域、医药领域和工业领域占有不可替代的地位,其资源与人类的生活和生产有着不可分割的关系。在现实生活中,放线菌产生的多种抗生素均已得到广泛应用。然而,由于抗生素的滥用出现的耐药问题日趋严重,已成为临床治疗的难题。因此,继续从放线菌中寻找结构新颖,活性独特的化合物仍然具有重要意义。本次研究的菌株来源于海南省乐东县鹦哥岭土壤,通过分离筛选确定放线菌YG-7为目标菌株,并通过形态特征和16S rDNA序列测定及系统发育树分析,鉴定其为iStreptomycessp.YG-7。实验通过不同培养基,不同的培养时间段对放线菌YG-7进行发酵优化,并综合活性测试和化学成分分析,确定最优的发酵条件。同时也对发酵粗提物的稳定性进行分析,结果显示放线菌YG-7的抗MRSA(methicillin-resistant Staphylococcusaureus,MRSA)活性物质耐热性能不高,在20~40℃下较稳定,温度达到40℃后,随着温度的上升,生物活性下降;在强酸和碱性条件下活性物质不稳定;在紫外灯的照射下有较好的稳定性。利用多种柱色谱技术对放线菌YG-7的次生代谢产物分离纯化,通过波谱数据分析并结合理化常数鉴定化合物的结构。本次从放线菌YG-7的次生代谢产物中共分离鉴定 26 个单体化合物,分别为:(1R,5R,E)-3-(2-(2,6-dioxopiperidin-4-yl)ethylidene)-1,5-dimethyl-4-oxocyclohexyl acetate(1),(1S,5R,E)-3-(2-(2,6-dioxopiperidin-4-yl)ethylidene)-1,5-dimethyl-4-oxocyclohexyl acetate(2),4-((E)-2-((3R,5R)-3,5-dimethyl-2-oxocyclohexylidene)ethyl)piperidine-2,6-dione(3),4-((E)-2-((3R,5S)-3,5-dimethyl-2-oxocyclohexylidene)ethyl)piperidine-2,6-dione(4),iso-cycloheximide(5),cycloheximide(6),4-(2-(2-hydroxy-3,5-dimethylphenyl)-2-oxoethyl)piperidine-2,6-dione(7),3-[2-[2-hydroxy-3-(hydroxymethyl)-5-methylphenyl]-2-oxoethyl]glutarimide(8),acetoxycycloheximide(9),2-acetamido-5-chlorobenzamide(10),cyclo(L-Pro-L-Leu)(11),3,6-dibenzylidene-2,5-piperazinedione(12),albonoursin(13),(3Z,6S)-3-benzylidene-6-isobutylpiperazine-2,5-dione(14),(3S,6Z)-3-benzyl-6-benzylidene-2,5-dioxopiperazine(15),3-hydroxy-2-methyl-4-pyrone(Aldrich)(16),isophthalic acid(17),methyl 3-carbamoylbenzoate(18),2,3-dihydroxypropyl hexadecanoate(19),N-phenylacetamide(20),4-methoxy-6-methyltetrahydro-2H-pyran-2,5-diol(21),methyl-α-D-olivoside(22),4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid(23),p-hydroxybenzoic acid(24),m-hydroxybenzoic acid(25),isophthalic acid(26)。其中,9个酰胺类化合物(1~9),5个哌嗪类化合物(11~15),2个糖苷类化合物(21~22),4个苯甲酸类化合物(23~26),1个氯代化合物(10),1个酯类化合物(19)。化合物1,2为新化合物,化合物10、17、18为新天然产物。采用滤纸片扩散法、pNPG法分别测试化合物的抗菌和α-葡萄糖苷酶抑制活性。生物活性测试结果显示,化合物10、12~15、17~18具有α-葡萄糖苷酶抑制活性,其抑制率范围为12.67%~39.50%;化合物1~7对白色念珠菌、酵母菌、香蕉枯萎病菌1号小种、香蕉炭疽菌、芒果拟盘多毛孢和水稻稻瘟病菌等真菌均具有生长抑制活性,其抑菌效果范围为7.24~11.25 mm;化合物10~26则对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌等细菌具有生长抑制活性,其抑菌效果范围为7.11~10.51 mm。
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