柑橘幼果功能成分提取分析及抗氧化活性研究

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本试验选取柚类:胡柚;宽皮橘类:早熟温州蜜柑宫川,中晚熟温州蜜柑山田、瓯柑、椪柑;甜橙类:甜橙的幼果为原料,在五个不同生长时期采样(时间为5月17日,5月27日,6月16日,7月6日,7月16日),测定功能成分及抗氧化活性规律变化,目的是为柑橘资源的充分利用提供理论参考。主要结论如下:(1)响应面法优化椪柑幼果中辛弗林的超声波辅助提取工艺,采用超声波辅助提取对椪柑幼果中辛弗林的提取工艺进行研究。在单因素试验基础上,选择影响提取效果的甲醇体积分数、超声提取温度、超声时间和液料比四个关键因素,以辛弗林得率为响应值,根据中心组合(Central Composite Design)实验设计原理采用四因素五水平试验方案,模拟得到辛弗林得率的二次多项式回归方程的预测模型,确定超声辅助提取椪柑幼果中的辛弗林最佳条件为:甲醇体积分数为70.46%,超声提取温度为34.45℃,超声时间为45min,液料比为24.84mL/g,该条件下椪柑幼果中辛弗林得率的预测值为10.88mg/g DW,实验测定值达到10.85mg/g DW,与回归方程的理论预测值相吻合。(2)应用微波辅助提取椪柑幼果中的总黄酮。研究微波功率、乙醇体积分数、微波时间及液固比四个单因素对于总黄酮提取量的影响,并利用正交试验设计对总黄酮的提取工艺参数进行优化.结果表明:在微波功率616W,乙醇体积分数50%,微波时间40s,液固比30mL/g的提取条件下,重复三次试验,椪柑幼果中总黄酮的平均提取量达到24.9452mg RT/g DW。各因素对提取量的影响主次顺序依次为乙醇体积分数>液固比>微波时间>微波功率。微波提取椪柑幼果总黄酮能够有效缩短提取时间,操作简便等优点。(3)不同生长期不同柑橘品种功能活性成分含量测定分析,包括7种酚酸、17种黄酮、辛弗林、总黄酮及总酚含量,探讨其在不同品种在不同的生长期的变化特点。采用高效液相色谱测定了柑橘幼果中的7种酚酸,包括三种苯甲酸型:原儿茶酸、对羟基苯甲酸和香草酸;四种肉桂酸型酚酸:咖啡酸、对香豆酸、阿魏酸和芥子酸。总体来看,肉桂酸型酚酸含量总和是苯甲酸型酚酸含量总和的11.27倍。肉桂酸型酚酸含量最高的是阿魏酸,苯甲酸型酚酸平均含量最高的是对羟基苯甲酸。七种酚酸的平均含量从高到低依次为:阿魏酸>对香豆酸>咖啡酸>对羟基苯甲酸>香草酸>芥子酸>原儿茶酸,阿魏酸的平均含量为3144.23μg/g DW,原儿茶酸的平均含量为15.59μg/g DW。柑橘幼果在不同生长期的酚酸含量差异较大。随着生长期的延长,同种柑橘幼果中原儿茶酸、咖啡酸和芥子酸含量总体呈上升趋势,对羟基苯甲酸、香草酸和阿魏酸含量总体是先增加后减少。同一采收期,七种酚酸含量总和的顺序由高到低,依次为瓯柑>碰柑>早熟温州蜜柑宫川>中晚熟温州蜜柑山田>甜橙>胡柚。所有柑橘幼果10种黄烷酮含量总和高于7种黄酮含量总和,其中,新橙皮苷的含量最高,新橙皮苷含量最高的是瓯柑幼果,变异幅度为150.09-316.56mg/g DW。其次是柚皮苷、芸香柚皮苷和橙皮苷,总和分别为472.32mg/g DW、308.61mg/g DW、258.32mg/g DW。所有柑橘幼果中柚皮素的含量总和是10种黄烷酮含量最低的,为0.46mg/g DW。17种黄酮总和的含量最高的是瓯柑和胡柚,随着生长期的延长,总体均呈下降趋势,5次采收的瓯柑中的黄酮总和从358.38mg/g DW下降至203.68mg/g DW,胡柚的黄酮总和从268.80mg/g DW下降至85.27mg/gDW。由此可知瓯柑和胡柚在6月16日之前的幼果可以作为黄酮提取的较好来源。5个采收期的柑橘幼果辛弗林平均含量由高到低依次为:椪柑>瓯柑>中晚熟温州蜜柑山田>早熟温州蜜柑宫川>甜橙>胡柚,其中椪柑和胡柚中辛弗林的平均含量为21.93mg/g DW、0.52mg/g DW。随着生长期的延长,柑橘幼果中辛弗林含量均呈现下降趋势。以采收期为维度,同一柑橘品种中总黄酮和总酚的含量均随生长期的延长呈先增加后减少。以柑橘品种为维度,5次采收期的总黄酮平均含量由高到低依次为瓯柑>胡柚>椪柑>中晚熟温州蜜柑山田>早熟温州蜜柑宫川>甜橙,平均含量分别为41.25、34.28、30.59、26.84、22.96、22.61mg芦丁/gDW,总酚平均含量由低到高依次为瓯柑>胡柚>甜橙>中晚熟温州蜜柑山田>椪柑>早熟温州蜜柑宫川,平均含量分别为101.01、80.73、46.82、43.39、39.91、7.13mg GAE/g DW。(4)采用四种评价方法,分别是:ABTS自由基清除效果,DPPH自由基清除效果,FRAP铁离子还原力,ORAC氧自由基吸收能力评价所有柑橘幼果的抗氧化能力,并对幼果抗氧化能力和活性成分含量进行相关性分析。四种体系所有柑橘幼果的平均TEAC值由高到低依次为:ORAC法>ABTS法>FRAP法>DPPH法。用APC指数(Antioxidant potency composite index)进行柑橘幼果抗氧化活性综合评价。按照柑橘品种进行分析,抗氧化活性综合指数瓯柑>胡柚>甜橙>椪柑>中晚熟温州蜜柑山田>早熟温州蜜柑宫川,依次为69.66、49.28、46.72、25.12、23.34、21.55,说明瓯柑幼果的平均抗氧化活性高于其他柑橘幼果。随着生长期的延长,柑橘幼果的抗氧化活性综合评价指数的变化趋势和ABTS体系评价得到的TEAC值的变化趋势相同,除了胡柚幼果呈下降趋势,其余柑橘幼果抗氧化能力呈现先逐渐上升,在5月57日或者6月16日达到最高值后开始下降。柑橘幼果提取液中总酚、总黄酮含量与ABTS、DPPH、FRAP三种抗氧化方法测定的抗氧化能力之间均呈正相关性,且相关系数均为极显著(p<0.01),表明在柑橘幼果甲醇提取液中总酚含量越高,总黄酮含量越高,抗氧化能力越强。辛弗林含量和四种抗氧化体系下测定的柑橘幼果抗氧化能力相关性不显著。
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