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研究背景:胰腺癌因其预后差和死亡率高而成为全球最难治愈的癌症之一。胰腺癌发病位置隐匿,80-85%的确诊患者已经失去了手术治愈的机会,目前化学疗法仍然是胰腺癌临床最常选择的治疗方案。临床中,中药注射剂常作为恶性肿瘤的治疗或辅助治疗药物,联合放化疗发挥增效减毒的作用。艾迪注射液是常用的抗肿瘤类中药注射剂,具有清热解毒、消瘀散结的作用,在辅助放化疗使用时能够起到增强疗效、提高患者对放化疗的耐受力、减少不良反应、保护机体免疫功能等作用。然而,艾迪注射液在胰腺癌治疗中的临床疗效综合评价和相关作用机制研究数量较少,亟需开展进一步深入研究。研究目的:本研究综合运用网状Meta分析、网络药理学和分子生物学实验等方法,开展艾迪注射液治疗胰腺癌的临床评价和作用机制研究,希冀初步探明艾迪注射液在胰腺癌治疗中的临床特点和分子作用机制,进而为艾迪注射液上市后再评价提供参考,为临床中胰腺癌诊疗方案的优化提供借鉴。研究方法:1网状Meta分析计算机检索中国知网、万方、维普、PubMed等9个中英文数据库和临床试验注册网站,检索时间为建库至2020年12月31日,全面收集艾迪注射液等中药注射剂联合化疗治疗胰腺癌的随机对照试验（RCT）,并进行文献筛选、质量评价和信息提取。提取数据并进行计算分析。本研究选择临床疗效,生活质量,不良反应发生率,生存时间和疼痛缓解率等指标作为临床评价依据。所有计算结果以OR值和95%CI表示,并绘制网状关系图、森林图、比较-校正漏斗图、雷达图等全方位展示比较结果。2网络药理学本研究通过液质联用分析和文献检索得到艾迪注射液中的化学成分,通过PubChem数据库寻找其对应的SMILES结构,进而在STITCH、SwissTargetPrediction和TCMSP数据库中寻找各个化合物对应的已知或预测靶点。通过检索,分别在TTD、OMIM、MalaCards人类疾病数据库和DisGeNET数据库中寻找疾病的潜在治疗靶点。之后使用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用网络并进行MCODE模块分析,应用R软件进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析并进行可视化。使用AutoDockTools、AutoDock-Vina和PyMOL软件对重要靶点及其相关化合物进行分子对接运算。3分子生物学实验以人胰腺癌细胞Panc-1作为分子生物学研究对象,通过CCK-8实验检测艾迪注射液作用于细胞24、48和72小时后的细胞活力,根据细胞生长曲线,探索艾迪注射液的最佳作用浓度和作用时间。应用蛋白质印迹法和RT-qPCR技术,选择低、中、高三个浓度的艾迪注射液作用于Panc-1,培养48小时,分别检测通过网络药理学预测的关键靶点在药物作用下的蛋白质水平和mRNA水平的表达变化,从而验证艾迪注射液治疗胰腺癌的作用机制。4动物实验将人胰腺癌细胞Panc-1注射于裸鼠右腋皮下,建立胰腺癌荷瘤裸小鼠模型。将造模小鼠分为模型组、艾迪注射液低浓度组、中浓度组和高浓度组,进行连续21天给药。给药期间每三天进行小鼠体重和肿瘤组织体积监测,于给药完成后取出瘤组织进行称重,计算各组抑瘤率,并进行HE染色。研究结果:1中药注射剂联合化疗治疗胰腺癌的网状Meta分析结果共纳入33篇RCTs,包括8种中药注射剂和2011名患者。网状Meta分析结果显示,艾迪注射液可以显著提高临床疗效（OR=0.34,95%CI:0.16-0.74）,它的临床优势在于可以显著缓解白细胞减少和血小板减少（OR=5.65,95%CI:1.18-28.13）。此外,复方苦参注射液在改善患者生存质量、缓解胃肠道不良反应方面具有优势;斑蝥酸钠维生素B6注射液在缓解胃肠道反应和缓解白细胞减少方面表现突出;康莱特注射液在改善患者生存质量和缓解血小板降低等方面具有优势。2艾迪注射液治疗胰腺癌的药效学研究给药21天后,艾迪注射液中浓度组和高浓度组的肿瘤组织体积显著小于模型组,其中高浓度组的肿瘤生长速度显著降低。艾迪注射液低剂量组的抑瘤率为17.51%,随给药浓度增加,中剂量和高剂量组的抑瘤率分别增加至43.42%和55.31%,抑瘤率显著增高。HE染色表明,相较模型组,随给药浓度增加,肿瘤组织中的结构异常程度减轻,灶性坏死区域减小,空泡减少,可见深色的炎症细胞,并且组织内出现红细胞浸润。这提示艾迪注射液可以抑制肿瘤生长速度,控制病癌症进展。3艾迪注射液治疗胰腺癌的网络药理学研究通过液质联用方法和检索文献共得到艾迪注射液中的23个化学成分和280个潜在靶点,其中22个化合物、60个靶点和171条信号通路与胰腺癌关系密切。经过筛选,最终有 7 个靶点（TNF、VEGFA、HSP90AA1、MAPK14、CASP3、TP53 和 JUN）被预测为艾迪注射液治疗胰腺癌的关键靶点。艾迪注射液中可能起到重要作用的活性成分有人参皂苷Rb1、人参皂苷Rf、芒柄花素和黄芪甲苷等。相关关键靶点的KEGG富集分析表明,最重要的通路是脂质与动脉粥样硬化通路。分子对接结果显示,与TP53和VEGFA蛋白亲和力最高的化合物为黄芪甲苷,与CASP3蛋白亲和力最高的化合物为人参皂苷Rb1,与JUN蛋白亲和力最高的化合物是芒柄花素。4艾迪注射液对胰腺癌细胞作用机制的实验CCK-8实验结果显示,艾迪注射液作用于Panc-1细胞时表现出先促进增殖、再诱导细胞凋亡的作用,并发现24小时的半数最大抑制浓度（IC50）值为3.738（3.376,4.238）。48 小时和 72 小时的 IC50值分别为 3.036（2.899,3.187）和 2.567（2.467,2.694）。本研究运用蛋白免疫印迹方法和RT-qPCR技术检测了网络药理学预测的关键靶点的表达水平,结果显示Panc-1细胞在艾迪注射液的作用下,TP53、VEGFA和CASP3蛋白质和mRNA表达水平降低,JUN蛋白和mRNA表达水平升高。5艾迪注射液治疗白细胞减少症的网络药理学研究此部分研究结果表明,艾迪注射液中含有的23个化学成分和280个潜在靶点中,有22个化合物、50个靶点和211条信号通路与白细胞减少症关系密切。AKT1、PTGS2、STAT3、VEGFA和TP53等5个靶点被预测为艾迪注射液缓解白细胞减少症的关键靶点。艾迪注射液中可能起到重要作用的活性成分是:黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd和人参皂苷Rf。相关关键靶点的KEGG富集分析表明,最重要的通路是人类巨细胞病毒感染通路。研究结论:本研究应用网状Meta分析方法,对33个RCTs中的共8种中药注射剂联合化疗治疗胰腺癌的临床疗效和安全性进行了评价。结果显示,艾迪注射液、鸦胆子油乳注射液、康艾注射液和华蟾素注射液联合化疗表现出较好的抗癌作用。同时,艾迪注射液表现出了较为突出的缓解白细胞减少和血小板减少的作用。药效学研究结果表明,艾迪注射液可以降低肿瘤组织增长速度,并减轻肿瘤组织中的结构异常程度。网络药理学研究结果表明,艾迪注射液治疗胰腺癌主要作用于TNF和VEGFA等7个关键靶点,最重要的通路是脂质与动脉粥样硬化通路。经分子生物学实验检测蛋白质和mRNA表达水平,TP53和CASP3在细胞中表达量降低,JUN表达量升高。网络药理学研究表明,艾迪注射液治疗白细胞减少症（中性粒细胞减少症）主要作用于AKT1和VEGFA等5个关键靶点,认为重要的通路是人类巨细胞病毒感染通路、PI3K-AKT信号通路和JAK-STAT信号通路。