乳腺癌细胞中温度敏感TRP离子通道的表达模式研究

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恶性肿瘤是世界性的公共问题,其中乳腺癌在全球恶性肿瘤排名中一直位居前列,亦是女性中发病率最高、最常见的恶性肿瘤,也是女性恶性肿瘤死亡顺位的首位。尽管在全球范围内,中国是乳腺癌的低发区,但近年来在我国也呈现逐年上升、年轻化的趋势。乳腺癌在不同患者之间的显著异质性,更进一步加大了研究和治疗的复杂性。瞬时受体电位(Transient Receptor Potential,TRP)离子通道在哺乳动物的不同组织和细胞类型中表达,作为钙离子通透和非选择性阳离子通道发挥重要作用,并且TRP离子通道也是钙、钠和镁等离子出入细胞的关键调节蛋白。在哺乳动物中,TRP离子通道主要分为六个亚家族:TRPA(ankyrin)、TRPC(canonical)、TRPV(vanilloid)、TRPM(melastatin)、TRPML(mucolipin)、TRPP(polycystin)。其中对温度敏感的一类离子通道称为温度敏感TRP(ThermoTRP)离子通道,目前报道的有11个Thermo-TRPs,分属于TRPV、TRPM、TRPA、TRPC亚家族。其中,研究较为广泛的有TRPA1、TRPV1、TRPV2、TRPV3、TRPV4、TRPM4、TRPM5、TRPM8。研究表明,温度敏感TRP离子通道与肿瘤的发生发展关系密切,可充当癌症治疗的潜在靶标。如相对前列腺上皮细胞,TRPM8在前列腺癌中上调,而前列腺癌早期诊断的一个指标PSA,同时充当TRPM8的内源性激活剂;在黑素瘤中激活TRPM8可影响癌细胞的存活;TRPV1和TRPV2可对胶质瘤细胞增殖、存活产生影响等等。这些无不提示着对肿瘤中温度敏感TRP离子通道研究的必要性,而相对其他癌种,针对乳腺癌中的温度敏感TRP离子通道的研究缺少全面与系统的报道。目的:确定乳腺癌细胞中Thermo-TRPs的表达水平差异;Thermo-TRPs的表达与乳腺癌细胞干性是否存在相关性。方法:1、质谱与数字PCR结合,确定乳腺正常细胞与25株乳腺癌细胞中Thermo-TRPs的蛋白和mRNA水平表达情况。2、流式细胞术对乳腺正常细胞和乳腺癌细胞中侧群细胞进行分析。3、干细胞成球实验进一步确定乳腺癌细胞干性与Thermo-TRPs表达关系。结果:1、质谱和数字PCR结果显示:TRPA1、TRPM8、TRPV3、TRPV4在乳腺正常细胞和25株乳腺癌细胞中蛋白水平上普遍表达,而TRPM4、TRPM5、TRPV1、TRPV2在不同乳腺癌细胞系中蛋白水平存在明显差异。mRNA水平上显示:相对乳腺正常细胞,TRPV1在25株乳腺癌细胞系中50%以上过表达,TRPA1、TRPM4、TRPM5、TRPM8、TRPV3、TRPV4在25株乳腺癌细胞系50%-75%以上相对乳腺正常细胞表达持平或偏低。2、对乳腺正常细胞和乳腺癌细胞进行侧群细胞分析后,与Thermo-TRPs表达水平对比发现,侧群细胞比例较高的细胞系中TRPV1表达偏低,二者呈现负相关趋势。3、干细胞成球实验也验证了成球能力较强的细胞系中TRPV1表达偏低,二者呈现负相关趋势。结论:Thermo-TRPs在不同乳腺癌细胞系中表达存在差异,较之与正常乳腺上皮细胞,Thermo-TRPs在不同的乳腺癌细胞系中呈现过表达或者低表达情况;TRPV1表达水平与乳腺癌细胞干性负相关。
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