克拉维酸产生菌菌种选育及发酵提取工艺优化

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根据棒状链霉菌的生物合成途径及其代谢调控机制,采用理性化筛选模型,以zr2002bs-001为出发菌株,经过紫外线诱变,筛选出甘油耐受株,再经过60Co射线诱变,以克拉维酸的结构类似物—舒巴坦钠为筛选压力,筛选出产物耐受菌株,又经过自然转接筛选,获得高产突变株zr2002bs-r2029,其发酵单位达到4698mg/L,发酵水平比诱变前提高了38.24%。以新获突变菌株zr2002bs-r2029为研究对象,对摇瓶种子培养的初始pH、培养温度、种龄进行了考察,确定克拉维酸种子培养基的初始pH为7.0,培养的最适温度为25℃,最佳培养周期为54h。对发酵培养基进行了优化,表明中温豆粉是克拉维酸发酵的最佳有机氮源,以豆油作为三油酸甘油酯的替代物进行克拉维酸发酵可行;在发酵至60h后适当补入甘油,能够促使产物的进一步积累。在摇瓶工艺优化的基础上,对发酵罐培养基进行优化,确定了黄豆饼粉、豆油、甘油的最适用量分别为4.2%、1.0%和1.0%。在发酵22h后调节体系中的甘油量在1~3g/L,发酵过程中罐温控制在28±2℃;空气流量为0.8vvm-1.2vvm;搅拌转速500rpm左右,要求溶氧不低于20%,pH6.90~7.10,菌丝浓度维持在25~30%,克拉维酸发酵单位达到5800mg/L以上。通过对克拉维酸钾提取制备工艺进行研究,实现了克拉维酸钾水相制备新工艺,各步收率均在80%以上,产品质量合格。为提高整个提取过程中的安全性,考察了克拉维酸钾与辅料微晶纤维素的共养晶、共干燥工艺,得到的混粉粒度小、均一性好。
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