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青葙子(Celosiae Semen)来源于苋科青葙属植物青葙(Celosia argentea L.)的干燥成熟种子,始载于《神农本草经》,收录于2010版药典。其味苦、性微寒,归肝经。具有清肝,明目,退翳之功效。研究背景:我国传统医学中,对于青葙子清肝明目的应用已具有悠久的历史,而现代药理研究表明,青葙子水提物中的多糖成分具有肝细胞保护作用;印度民间用其乙醇提取物用于治疗糖尿病。为了深入开发利用青葙子资源,本课题组在青葙子化学成分进行了较为系统性的研究,首次从青葙子中分得到9个五环三萜皂苷类化合物。本论文作为延续性工作,着重对青葙总皂苷进行保肝、降血脂及抗动脉粥样硬化的药效学研究,旨在为青葙子资源的开发利用以及青葙总皂苷的新药研发奠定基础。研究目的:通过对青葙总皂苷保肝、降血脂及抗动脉粥样硬化的药效学研究,明确其药理活性,并对其药效机理进行深入的探讨,为青葙子的开发利用以及新药的研发奠定基础。研究方法与结果:1.青葙总皂苷(CAS)的保肝作用研究:通过建立不同的肝损伤动物模型进行青葙总皂苷的保肝作用研究;(1)小鼠急性肝损伤模型:给予小鼠腹腔注射0.10%四氯化碳橄榄油溶液建立小鼠急性肝损伤动物模型,设置CAS三个给药剂量组:0.6mg/kg、2.5mg/kg、10.0mg/kg,结果发现,预防性给药7天,与模型组相比,CAS在2.5mg/kg-10.0mg/kg剂量范围内,可显著性降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性(P?0.01),对小鼠肝脏脂质过氧化指标测定发现,与模型组相比,CAS在0.6mg/kg-10.0mg/kg剂量范围内,可显著性降低肝组织丙二醛(MDA)含量,同时升高超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性(P?0.01),肝组织病理学切片观察,CAS各预防给药组肝细胞受损伤程度减轻;(2)大鼠慢性肝损伤模型:每周两次给予大鼠腹腔注射40%四氯化碳橄榄油溶液,持续7周,可造成大鼠慢性肝损伤模型,实验设置CAS三个给药剂量组:0.5mg/kg、2.0mg/kg、8 .0mg/kg,造模的同时,每天灌胃给药一次,结果发现,给药7周,与模型组相比,CAS在2.0mg/kg-8.0mg/kg剂量范围内,可显著性降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性(P?0.05),且CAS 8.0mg/kg剂量给药可显著性降低血清碱性磷酸酶的活性(P?0.05)和升高白球蛋白比(A/G)(P?0.05),肝脏病理切片同样显示出CAS良好的保肝作用;(3)刀豆蛋白A诱导免疫性肝损伤模型:给予小鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA) 20mg/kg,建立小鼠免疫性肝损伤模型,设置CAS三个给药剂量组:12.5mg/kg、25.0mg/kg、50.0mg/kg,结果发现,预防性给药11天,与模型组相比,CAS在25mg/kg-50.0mg/kg剂量范围内,可显著性降低血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性(P?0.05)。2. CAS的降血脂作用研究:通过建立不同的高血脂动物模型来进行青葙总皂苷的降血脂作用研究;(1)给予大鼠腹腔注射Triton WR 1339生理盐水溶液,建立大鼠急性高血脂模型,实验设置CAS三个给药剂量组:10.0mg/kg、20.0mg/kg、40 .0mg/kg,结果发现,预防性给药30天,与模型组相比,CAS在20.0mg/kg-40.0mg/kg剂量范围内,可显著性降低血清TC(P ?0.05),提示CAS有降血脂作用。(2)给予大鼠高脂饲料建立大鼠高脂血症模型,实验设置CAS三个给药剂量组:10.0mg/kg、20.0mg/kg、40 .0mg/kg,结果发现给药四周后,与模型组相比,CAS在10.0mg/kg-40.0cmg/kg剂量范围内,可显著性降低大鼠血清总胆固醇(TC)含量(P?0.01),同时AST活性亦显著性降低(P?0.01),CAS 40mg/kg剂量还可以显著性降低大鼠冠心病危险指数(CRI)(P?0.01),对大鼠肝组织匀浆指标测定发现,CAS在10mg/kg-40mg/kg剂量范围内,可显著性降低大鼠肝组织TC和甘油三酯(TG)的含量(P?0.01),同时亦显著性降低MDA含量(P?0.01);(3)给予兔高脂饲料10天建立兔高脂血症模型,实验设置CAS两个给药剂量组:6.0mg/kg、24.0mg/kg,给药10天、20天、30天分别取血,观察青葙总皂苷对家兔血清总胆固醇水平的动态影响,结果发现,CAS可有效降低血清总胆固醇含量,且随着给药时间的延长,其降血脂的作用并未减弱,且有一定的量效关系,CAS在24.0mg/kg剂量,给药10天、20天、30天时均可显著性降低兔血清总胆固醇(TC)含量(P?0.01),CAS 6mg/kg剂量给药20天、30天时可显著性降低兔血清总胆固醇(TC)含量(P?0.05),其降血脂作用呈一定量效关系;给药30天后,CAS 24.0mg/kg剂量可显著性降低兔动脉粥样硬化指数(AI)以及CR(IP?0.01),CAS 24.0mg/kg剂量可显著性降低兔动脉粥样硬化指数(AI)(P?0.05);CAS 6.0mg/kg可显著性降低兔肝脏中TC含量(P?0.05),CAS 24.0mg/kg可显著性降低兔肝脏中TC含量(P?0.01),TG含量(P?0.05),MDA含量(P?0.05),以及升高LPS活性(P?0.05)。3. CAS初步急性毒性实验:急性毒性实验结果表明,一次性灌胃给药,CAS的无毒剂量为672mg/kg,半数致死量LD50值为713.4mg/kg。结论:青葙总皂苷可有效防治四氯化碳导致的肝损伤,可显著性降低造模组大鼠及家兔的血清TC含量,降低兔AI其机制可能均与其抗氧化作用有关。本研究结果为揭示中药青葙子药效物质基础及作用机制奠定了基础。