论文部分内容阅读
目的参附注射液是由参附汤发展形成的中药复方制剂,由红参和附子两味药构成。临床上,参附注射液常用于治疗各种休克、心律失常、心力衰竭等。本实验制作SD大鼠慢性心衰模型,从整体动物、细胞以及超微结构等水平,对参附注射液影响心肌收缩力、改善心脏功能展开研究,为参附注射液用于心力衰竭治疗提供新的理论依据。方法(1)实验分组:本实验分为假手术组、心力衰竭组以及参附注射液处理组(6ml/kg),共纳入SD大鼠60只,随机分入上述3组,每组20只。细胞实验中参附注射液处理浓度设置1.25%、2.5%、5%以及10%浓度梯度;(2)SD大鼠心力衰竭模型:采用冠状动脉左前降支结扎法制作慢性心衰模型。心力衰竭组以及参附注射液处理组均施行冠状动脉左前降支结扎,假手术组手术操作步骤相同,但不结扎左前降支。常规饮食饲养4周后检测各组心衰指标的变化情况,各组大鼠心肌标本按照常规透射电镜取材技术制样后,透射电镜下观察超微结构的变化情况;(3)心肌细胞L-型钙通道电流(ICa-L)、肌浆网内钙容量测定:Langendorff灌流法分离单个心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术检测Ica.L,利用Fluo-3/AM负载心肌细胞,咖啡因刺激后记录肌浆网内钙含量的变化;(4)统计学处理:采用SPSS21.0统计软件包进行分析。本研究的全部计量资料均采用均数±标准差(mean±SD)表示。三组以上资料比较采用方差分析(one way-ANO VA),组间两两比较采用LSD-t检验,p<0.05认为差异有统计学意义。结果(1)参附注射液对慢性心衰大鼠心功能的影响:同假手术组大鼠相比,心力衰竭组大鼠左室心肌舒张/收缩末期内径(LVIDd、LVIDs)明显变大(p<0.01),舒张末期左室后壁厚度/收缩末期左室后壁厚度(LVPWd、LVPWs)明显变小(p<0.01),舒张末期左室前壁厚度/收缩末期左室前壁厚度(LVAWd、LVAWs)明显变小(p<0.01),射血分数(ejection fraction,EF)以及左室短轴缩短率(fractional shortening,FS)明显变小(p<0.01);同心力衰竭组大鼠相比,参附注射液处理组(6ml/kg)大鼠左室心肌舒张末期内径/收缩末期内径(LVIDd、LVIDs)明显变小(p<0.01),舒张末期左室后壁厚度/缩末期左室后壁厚度(LVPWd、LVPWs)明显变大(p<0.01),舒张末期左室前壁厚度/收缩末期左室前壁厚度(LVAWd、LVAWs)明显变火(p<0.01),射血分数(ejection fraction,EF)以及左室短轴缩短率(fractional shortening,FS)明显变大(p<0.01);(2)参附注射液对慢性心衰大鼠超微结构的影响:假手术组大鼠心肌肌纤维整齐排列,肌丝之间的线粒体结构完整,内部嵴清晰可见,未见肿胀或破裂。心力衰竭组大鼠心肌出现大面积肌丝溶解、断裂,排列松散混乱,线粒体肿胀变形,内部嵴消失。参附注射液处理组大鼠心肌心肌肌丝结构排列整齐,可见轻度溶解,线粒体结构清晰完整,大部分嵴结构完整可见;(3)参附注射液对心肌细胞L-型钙通道电流(ICa-L)的影响:心力衰竭组大鼠心肌细胞的Ica-L强度较假手术组大鼠ICa-L强度降低(p<0.05)。同心衰组相比,参附注射液1.25%、2.5%、5%以及10%浓度处理组可以浓度依赖的增大Ica-L强度(p<0.05),其中除5%、10%浓度处理组相比未见显著差异外,各浓度之间ICa-L强度增大差异显著(p<0.05)。此外,假手术组大鼠心肌细胞给予1.25%、2.5%、5%以及10%浓度参附注射液处理后,可见ICa-L强度浓度依赖的增大(p<0.05),而5%、10%浓度处理组相比未见显著差异;(4)参附注射液对心肌细胞肌浆网钙含量的影响:心力衰竭组大鼠Fluo-3/AM负载心肌细胞后,较假手术组大鼠荧光强度降低(p<0.05),且荧光强度变化的平均值(AF/F0)也明显低于假手术组(p<0.05)。同心衰组相比,参附注射液1.25%、2.5%、5%以及10%浓度处理组大鼠Fluo-3/AM负载心肌细胞后,参附注射液可以浓度依赖的增大荧光强度(p<0.05),且荧光强度变化的平均值(AF/F0)也明显高于心衰组(p<0.05),其中5%、10%浓度处理组荧光强度变化未见显著差异。此外,假手术组大鼠心肌细胞给予1.25%、2.5%、5%以及10%浓度参附注射液刺激后,可见参附注射液亦可以浓度依赖的增大荧光强度(p<0.05),5%、10%浓度处理组相比未见显著差异。结论参附注射液可以改善心力衰竭大鼠的心功能,其可能的机制是通过增强L型钙通道电流(ICa-L)强度,以及增加肌浆网内钙含量,此外参附注射液亦可以改善心衰时心肌细胞的超微结构的损伤。本研究结果为参附注射液用于临床治疗心力衰竭提供了新的理论依据。